富血小板血漿對椎間盤早期退變中髓核細胞激活作用的研究.pdf

1、目的:
　　研究髓核細胞(NPCs)的活性及增殖能力與椎間盤退變(IDD)的關(guān)系，探索IDD退變的機制。在早期退變的髓核細胞中加入富血小板血漿(PRP)干預(yù)，檢測是否能增強NPCs活性及增殖能力從而促進椎間盤退變的修復(fù)。
　　方法:
　　1、取3月齡新西蘭大白兔，術(shù)前行MRI檢測其椎間盤無退變。并通過椎間盤穿刺法建立兔椎間盤退變模型。
　　2、取建模后2、4、8周兔行MRI檢測其是否建模成功，并分離培養(yǎng)其髓核細胞

2、，設(shè)定正常組為A組，建模后2周為B組，建模后4周為C組，建模后8周為D組，分別對4組細胞在P2代時行CCK-8檢測其活性，并行Real-time PCR檢測相關(guān)基因。
　　3、取兔耳緣動脈血，通過Landesberg法提取PRP。
　　4、取建模后2周兔的髓核細胞，設(shè)定單純培養(yǎng)組為對照組，用PRP進行干預(yù)3、4、5、6、7天后行CCK-8檢測其活性，行Real-time PCR檢測相關(guān)基因。
　　結(jié)果:
　　1、

3、成功建立兔椎間盤退變模型，經(jīng)MRI檢測顯示建模后的兔椎間盤退變程度隨著時間的增加而加重。
　　2、分離培養(yǎng)出NPCs，在鏡下顯示為梭形細胞。甲苯胺藍染色后，細胞胞體染為藍色，胞漿及細胞周圍出現(xiàn)紅色顆粒;免疫組化發(fā)現(xiàn)細胞胞漿內(nèi)充滿棕黃色顆粒。符合髓核細胞特點。
　　3、A、B、C、D四組細胞CCK-8測定的活性及增殖能力排序為:A＞B＞C＞D，Real-time PCR檢測CollagenⅡ及Sox-9值排序為A＞B＞C＞D，

4、隨著時間的延長，細胞的活力及軟骨化能力逐漸減退。
　　4、根據(jù)Landesberg法成功提取出PRP，血小板濃度為（1183±13.21）×109/L，符合PRP的標(biāo)準(zhǔn)。
　　5、在PRP干預(yù)的各個時間點，干預(yù)組的活性及軟骨化能力高于對照組。隨著干預(yù)時間的延長，細胞的活性沒有明顯增強。
　　結(jié)論:
　　1、椎間盤穿刺法能較好的造成兔椎間盤退變，退變隨著時間增加而加重。
　　2、本實驗通過采用酶消化法成功分離