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文檔簡介
1、研究背景和目的
退行性椎間盤疾病是脊柱外科最常見的病變之一,其退變過程緩慢進展。根本病因尚未明確,目前所知椎間盤退變是在多種機制及細胞因子的共同作用下,椎間盤內(nèi)的生化結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變,包括:椎間盤細胞的活性降低,髓核內(nèi)水分丟失,組織成份發(fā)生改變,退變時椎間盤中蛋白多糖、糖胺聚糖下降,含水量減少。因椎間盤形態(tài)和生化結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,其緩沖、分散壓力傳導的能力下降,機械性能發(fā)生改變。有動物實驗研究證明,髓核細胞活性的降低是椎間盤退變
2、的重要特點。隨著年齡的增長,椎間盤內(nèi)的脊索細胞消失,類軟骨細胞活性降低,同時伴有細胞外基質(zhì)分泌減少,膠原成分改變,這些改變使得髓核細胞分泌外基質(zhì)的能力降低,無法維持正常的椎間盤內(nèi)部環(huán)境的平衡,正常的椎間盤結(jié)構(gòu)發(fā)生破壞,最終導致其機械結(jié)構(gòu)的失穩(wěn)。
在臨床工作中,很難對微觀的生物學進行直接評估。隨著影像學技術(shù)的發(fā)展,MRI已經(jīng)成為各級別醫(yī)院常規(guī)的檢查手段之一,其已被公認為目前診斷椎間盤退變最合理精確的手段。近年來出現(xiàn)了很多基于
3、MRI的椎間盤退變分型,其中最廣泛被接受的MRI退變椎間盤分級為Pearce制定的五分級法,是目前能較好反應(yīng)椎間盤退變的分類方法。
本研究通過實驗,對不同退變程度腰椎間盤的髓核細胞進行培養(yǎng)及活性測定,明確髓核細胞活性與MRI退變分型的相關(guān)性。
方法
實驗共取腰椎間盤髓核組織20例,均為我科收治單一手術(shù)節(jié)段患者,其中A組2例,為正常椎間盤髓核組織(PearceⅠ&Ⅱ型,脊柱外傷患者,年齡為22歲和
4、24歲);B、C、D三組分別6例,分別為MRI分型輕、中、重度(PearceⅢ型,Ⅳ型,V型患者)退變椎間盤髓核組織(患者年齡在3545歲之間),均在同樣條件下進行體外髓核細胞分離培養(yǎng)。
術(shù)中取得腰椎間盤髓核組織送入實驗室,進行髓核細胞的分離與原代培養(yǎng),實驗過程采用傳一代細胞,消化原代細胞計數(shù)后定量分置于培養(yǎng)板培養(yǎng),于5d,10d,15d,20d,25d五個時間段消化用以細胞計數(shù)法和MTT比色法檢測細胞活性。
5、 結(jié)果
細胞計數(shù)結(jié)果:傳一代髓核細胞計數(shù)在同時間點上A組明顯高于B、C、D組,B組與C、D組之間存在統(tǒng)計學差異(P<0.05),C組和D組之間細胞計數(shù)無統(tǒng)計學差異,細胞計數(shù)的峰值出現(xiàn)在第20天。
MTT法測定結(jié)果:B、C、D組之間OD值(吸光值)在同時間點,各組之間均存在統(tǒng)計學差異(P<0.05),退變細胞OD值峰值出現(xiàn)在第20天,此后開始下降,提示細胞活性降低;正常髓核細胞OD值下降出現(xiàn)在25天之后。
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