瘦素對缺氧復氧培養(yǎng)L02肝細胞的保護作用和機制研究.pdf

1、肝臟缺血再灌注損傷(hepaticischemiareperfusioninjury，HIRI)的發(fā)病機制非常復雜，涉及的環(huán)節(jié)和因素很多，治療也相當棘手。長期以來，人們通過單一細胞因子對抗治療HIRI、阻斷MODS或MOF發(fā)展效果并不理想。目前，臨床對因HIRI所致的肝功能受損甚至肝細胞凋亡等除用蛋白酶抑制劑或糖皮質激素作為常規(guī)治療外，尚無其它較理想的治療手段。因此，尋找新的治療方法，對治療缺血再灌注損傷及一系列的并發(fā)癥、有效的控制HI

2、RI的發(fā)生和發(fā)展有著極其重要的作用。 肝臟缺血再灌注損傷過程中，由于缺血引起的細胞缺氧以及細胞能量物質的缺乏導致肝細胞DNA的損傷和細胞凋亡或脹亡的發(fā)生；肝臟缺血再灌注后，氧自由基大量產生、脂質代謝障礙和致炎細胞因子產生增多等，導致再灌注后細胞凋亡的進一步增加。Sasaki等報道HIRI過程中，細胞的死亡以凋亡為主。因此尋找新的治療方法，對抗肝臟缺血再灌注損傷和細胞凋亡有著重要的意義。 在抑制肝臟缺血再灌注損傷引起的細胞

3、凋亡的眾多研究中，已證實蛋白水解酶抑制劑、抗氧化劑、NO、CO、HO-1和抗凋亡基因治療等取得了一定的成效。瘦素是一種多靶器官、功能廣泛的蛋白激素，具有多種生理功能，包括抑制攝食、增加能量消耗外，還具有調節(jié)生長發(fā)育、炎癥和免疫功能；促進上皮細胞、血管生長等重要作用。已有研究證實Leptin在急性炎癥反應造成的組織損傷中發(fā)揮重要的作用，并能減輕腸缺血再灌注損傷大鼠肝臟功能的損害。在抑制肝細胞凋亡的研究，國內戴鍇等研究發(fā)現瘦素能抑制化療藥物

4、誘導的肝細胞凋亡，是通過上調抗凋亡基因Bcl—2的表達和抑制促凋亡基因Bax的表達實現抗凋亡的作用。但瘦素是否具有抑制肝臟缺血再灌注損傷引發(fā)的肝功能受損或細胞凋亡？以及其可能的作用機制如何？目前尚未見報道，很有必要就此問題進行研究，探討Leptin抗肝臟缺血再灌注損傷的可行性。 鑒于此，本研究將探討瘦素是否對缺氧復氧培養(yǎng)的人L02肝細胞是否有保護作用，以及其保護作用的可能機理。 研究分為兩個部分進行：1.在缺氧復氧狀態(tài)下

5、培養(yǎng)人L02肝細胞，復制肝臟缺血再灌注損傷模型，研究不同缺氧時間復氧后肝細胞存活率和肝功能改變及不同濃度瘦素對缺氧復氧培養(yǎng)L02肝細胞存活率影響、肝功能改變及形態(tài)學變化，探討瘦素是否具有保護作用；2.通過缺氧復氧培養(yǎng)人L02肝細胞，研究不同濃度瘦素對細胞凋亡形態(tài)學、氧化應激產物生成、炎癥因子的分泌、凋亡相關基因及蛋白的表達和H0-1基因及蛋白表達的影響，進一步探討瘦素對缺氧復氧培養(yǎng)L02肝細胞的保護作用和機制研究。 第一章瘦素對

6、不同缺氧復氧時間L02肝細胞存活率的影響 目的：本實驗利用缺氧復氧培養(yǎng)L02肝細胞，研究不同缺氧時間細胞存活率的變化及不同濃度瘦素對缺氧復氧L02細胞影響。 結論: 1.缺氧復氧培養(yǎng)L02肝細胞會導致細胞存活率下降和細胞損傷；隨著缺氧時間的延長，L02肝細胞存活率逐漸下降，以缺氧12h細胞存活率下降最明顯(76.01％)； 2.缺氧復氧培養(yǎng)會引起L02肝細胞ALT和AST水平上升，不同濃度瘦素預處理后AL

7、T和AST水平下降，提示瘦素對缺氧復氧培養(yǎng)的L02肝細胞肝功能有保護作用； 3.瘦素對經缺氧復氧培養(yǎng)后的L02肝細胞有保護作用，以400μg/LLEP濃度組保護效果明顯，能增加缺氧復氧后L02肝細胞的存活率，保護肝功能，減輕肝細胞凋亡的形態(tài)學改變。 第二章瘦素對缺氧復氧培養(yǎng)L02肝細胞凋亡影響 目的：本研究擬采用不同濃度的瘦素對缺氧復氧培養(yǎng)的L02肝細胞進行預處理，觀察細胞凋亡改變。 結論: 1.

8、缺氧復氧培養(yǎng)L02肝細胞引起細胞凋亡形態(tài)學改變和增加細胞凋亡率； 2.不同濃度瘦素預處理后細胞凋亡形態(tài)學改變減輕，細胞凋亡率下降，以400μg/LLEP作用明顯。 第三章瘦素對缺氧復氧培養(yǎng)L02肝細胞保護作用的機制研究 目的：本研究擬采用不同濃度的瘦素對缺氧復氧培養(yǎng)的L02肝細胞進行預處理，觀察瘦素保護作用的可能機制。 結論： 1.瘦素能夠增加增加缺氧復氧培養(yǎng)L02肝細胞SOD和總抗氧化能力產物的

9、生成，減少MDA和羥自由基水平。 2.瘦素減少缺氧復氧培養(yǎng)人L02肝細胞TNF—α和IL—6的水平，減少致炎癥反應因子的生成；且在低中濃度組作用明顯。 3.瘦素能增加缺氧復氧培養(yǎng)L02肝細胞的抑制凋亡基因Bcl—2的表達，減少促發(fā)凋亡基因Bax、、Fas和FasL表達，下調Fas蛋白的表達，且在低中濃度組作用明顯，表明瘦素的作用是通過Fas受體和配體、Bcl—2家族基因等信號傳導通路實現的。 4.瘦素能增強缺氧復