五肽胃泌素后處理對人胃黏膜上皮細胞缺氧-復氧損傷的保護作用及其機制研究.pdf

1、目的：研究五肽胃泌素后處理對人胃黏膜E皮細胞缺氧/復氧損傷的保護作用并初步探討其機制。
　　 方法：體外培養(yǎng)人胃黏膜上皮細胞系(GES-1)，建立缺氧/復氧損傷模型。實驗時細胞隨機分為五組：常氧對照組(N)、缺氧/復氧組（H/R）、五肽胃泌素(Pentagastrin)后處理組(PP)、胃泌素受體拮抗劑(Proglumide)+五肽胃泌素后處理組(P+PP)、DMSO溶劑對照組(DM)。采用MTT法檢測細胞活力，流式細胞儀檢測細

2、胞凋亡百分率，Hoechst33258熒光染色觀察凋亡細胞核的形態(tài)學變化，可見光分光光度法測定胞漿總超氧化物歧化酶(T-SOD)和丙二醛(MDA)水平，免疫印跡法測定胞漿Bcl-2、Bax的表達。
　　 結(jié)果：MTT檢測顯示，各組細胞存活率分別為100.0％±0％、54.8％±1.6％、73.8％±1.4％、62.0％±2.4％和54.2±％1.0％。五肽胃泌素后處理可以對胃粘膜細胞缺氧/復氧損傷具有保護作用，PP與H/R比較，

3、細胞存活率明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。胃泌素受體拮抗劑能夠翻轉(zhuǎn)五肽胃泌素后處理的保護效應，P+PP與PP比較，細胞存活率降低，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。流式細胞儀分析顯示，各組細胞凋亡率分別為2.62％±0.46％、14.74％±2.13％、5.28％±1.19％、10.18％±1.40％和13.51％±2.17％。PP與H/R比較，細胞凋亡率明顯降低，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。P+PP與PP比較，

4、細胞凋亡率升高，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。Hoechst33258熒光染色顯示，H/R凋亡陽性細胞增多，PP凋亡細胞減少，P+PP凋亡細胞增多?？梢姽夥止夤舛确z測顯示，各組細胞T-SOD活性分別為31.56％±2.87％，23.36％±1.43％,29.80％±1.59％,24.54％±1.09％和23.16％±1.65％U/mL。MDA水平分別為1.30％±0.54％,3.38％±1.05％,1.41％±0.52％，2.6

5、4％±0.37％和3.60％±0.82％nmol/mL。Westernblot檢測顯示，正常人胃黏膜上皮細胞表達Bcl-2和Bax;H/R與N比較，Bcl-2表達減少，Bax表達增加;PP與H/R比較，Bcl-2表達增加，Bax表達減少；P+PP與PP比較，Bcl-2表達減少，Bax表達增加。
　　 結(jié)論：1．缺氧2h/復氧4h模型能夠促使GES-1發(fā)生凋亡；2.100μmol/L的Pentagastrin后處理能夠明顯減少缺氧