人臍帶沃頓膠源性干細(xì)胞對脊髓損傷大鼠的修復(fù)作用及其對炎癥因子表達(dá)的影響.pdf

1、脊髓損傷(spinalcordinjury，SCI)是脊髓遭受外力損傷后引起的一種組織損壞，其主要表現(xiàn)為損傷平面以下感覺和運(yùn)動功能的喪失和大小便失禁等，給家庭和社會帶來沉重的負(fù)擔(dān)。因此，對SCI的干預(yù)和治療迫在眉睫。一般認(rèn)為，SCI后復(fù)雜的病理機(jī)制是其難以治愈的根本原因。干細(xì)胞是一類具有自我更新能力和多分化潛能的細(xì)胞。近年來，干細(xì)胞所具有的獨(dú)特性質(zhì)及在難治性疾病中的治療效果為SCI的治療帶來了希望。干細(xì)胞是一類具有自我更新能力和多分化潛

2、能的細(xì)胞。In'tAnker[1]等從臍帶中分離培養(yǎng)出的MSCs，經(jīng)過細(xì)胞表面免疫表型鑒定與骨髓來源的MSCs表面表型相似，且比骨髓來源的MSCs具有更強(qiáng)的擴(kuò)增和分化能力，因而備受關(guān)注。本實驗室的前期結(jié)果表明WJCs對脊髓損傷大鼠具有神經(jīng)保護(hù)作用，能夠促進(jìn)其運(yùn)動功能的恢復(fù)。但是，目前對WJCs治療SCI的分子機(jī)制還不清楚，本實驗旨在探討人臍帶沃頓膠間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymalstromalcellsderivedfromWhar

3、ton'sjellycells，WJCs）移植對大鼠脊髓損傷的治療作用及其可能機(jī)制。
　　方法
　　1、采用組織塊貼壁法在體外分離、培養(yǎng)WJCs并采用流式細(xì)胞術(shù)對其表面標(biāo)記物進(jìn)行檢測;
　　2、制作大鼠脊髓半切損傷模型，假手術(shù)組8只，模型組60只隨機(jī)分為對照組和WJCs移植組，每組有0h、3h、6h、12h、1d、3d、7d、14d、21d和28d共10個時間點(diǎn)，每個時間點(diǎn)3只大鼠（其中1d、3d、7d這3個時間點(diǎn)各6

4、只）。WJCs移植組于損傷后10min經(jīng)尾靜脈注射200μl的WJCs單細(xì)胞懸液(約1×106個WJCs);
　　3、移植后1d、3d、5d、7d、14d、21d和28d，應(yīng)用BBB評分法評測WJCs治療前后損傷大鼠運(yùn)動功能的改善情況;
　　4、移植后28d，應(yīng)用免疫組織化學(xué)及透射電鏡觀察損傷脊髓組織形態(tài)學(xué)變化;
　　5、移植后0h、3h、6h、12h、1d、3d和7d應(yīng)用實時熒光定量PCR檢測各組大鼠傷段脊髓組織MC

5、P-1、TNF-α和IL-10mRNA表達(dá)情況;移植后28d應(yīng)用實時熒光定量PCR方法檢測損傷大鼠脊髓組織BDNF、NSE、GFAPmRNA的表達(dá)情況;
　　6、移植后0h、3h、6h、12h、1d、3d和7d應(yīng)用Westernblot方法檢測損傷大鼠脊髓組織MCP-1、TNF-α和IL-10蛋白表達(dá)情況;移植后28d應(yīng)用Westernblot方法檢測損傷大鼠脊髓組織BDNF、NSE和GFAP蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果
　

6、　1.WJCs移植組與對照組大鼠的運(yùn)動功能傷后均有不同程度的恢復(fù)，移植組大鼠的運(yùn)動功能恢復(fù)較為明顯。
　　2.與對照組相比，WJCs移植組損傷區(qū)脊髓結(jié)構(gòu)比較完整，軸索中心建立連接。對照組和WJCs移植組損傷脊髓MCP-1、TNF-α和IL-10mRNA及蛋白的表達(dá)較假手術(shù)組有明顯的增加(p＜0.05);WJCs移植組與對照組相比，MCP-1、TNF-α的表達(dá)在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平均受到明顯抑制(p＜0.05)，而IL-10蛋白及mR

7、NA的表達(dá)顯著增強(qiáng)(p＜0.05)。
　　3.損傷后28d移植組和對照組傷段脊髓組織的GFAP、NSE和BDNFmRNA及蛋白的表達(dá)量均增加，且具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。
　　結(jié)論
　　WJCs靜脈移植后可改變脊髓損傷區(qū)的微環(huán)境，上調(diào)損傷局部的抑炎因子IL-10的表達(dá)，降低促炎因子MCP-1和TNF-α的表達(dá);同時，增加GFAP、NSE、BDNF等細(xì)胞因子的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)。這可能是WJCs調(diào)節(jié)免疫