臍帶源與骨髓源干細(xì)胞移植治療大鼠脊髓損傷的療效比較.pdf

1、目的：脊髓損傷后治療修復(fù)的研究一直是神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。近年來，間充質(zhì)干細(xì)胞在神經(jīng)組織的修復(fù)、再生和功能重建中所起的促進(jìn)作用日益引起關(guān)注。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)、臍帶間充質(zhì)細(xì)胞等均已被作為細(xì)胞來源用于脊髓損傷的神經(jīng)修復(fù)，并顯示其有促進(jìn)神經(jīng)再生及改善動(dòng)物神經(jīng)恢復(fù)的功能。但作為間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)經(jīng)典來源的骨髓組織移植效果不盡如人意，可能由于其隨年齡老化而致干細(xì)胞含量及其增殖能力顯著降低。因此，尋找新的MSCs來源有著重要

2、意義。我們最近從易于獲得、組織來源上較為原始的人臍帶組織中分離的MSCs，它的優(yōu)勢(shì)在于：①取材方便，易于獲得：②無倫理和道德等方面的障礙；③分離得到的細(xì)胞形態(tài)、表型相對(duì)均一；④臍帶內(nèi)的MSCs含量高，且細(xì)胞增殖能力穩(wěn)定，可在短時(shí)間內(nèi)獲得足夠的細(xì)胞；⑤人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(HUCMSCs)不表達(dá)HLA-DR分子，免疫源性較弱。本研究旨在觀察HUCMSCs和大鼠BMSCs移植到大鼠脊髓損傷模型后神經(jīng)功能恢復(fù)的情況和移植后的免疫排斥反應(yīng)，為細(xì)胞

3、移植尋找一種新型的具有良好應(yīng)用前景的細(xì)胞來源提供理論依據(jù)，進(jìn)而為其在脊髓損傷治療中應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1．獲取健康、足月、剖腹產(chǎn)胎兒臍帶，采用胰酶消化法獲取HUCMSCs。
　　 2．選取大鼠（約150克，雌雄不限），無菌條件下分離股骨脛骨，用密度梯度離心結(jié)合貼壁培養(yǎng)法分離純化大鼠BMSCs。
　　 3．選取同一批次的SD大鼠40只。采用隨機(jī)數(shù)字表法分成3組：臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植組16只、

4、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植組16只和PBS組8只。采用脊髓半切手術(shù)制作大鼠脊髓損傷模型，損傷后對(duì)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植組進(jìn)行HUCMSCs移植，對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植組行大鼠BMSCs移植，對(duì)PBS組移植同等劑量的PBS。通過BBB評(píng)分對(duì)各組動(dòng)物的術(shù)后恢復(fù)進(jìn)行評(píng)估比較。抽血測(cè)定移植后3組動(dòng)物不同時(shí)間點(diǎn)（移植后一周、一個(gè)月、兩個(gè)月及三個(gè)月）血中IL-2及IL-10的水平，來對(duì)比各組動(dòng)物移植后全身免疫排斥反應(yīng)的情況；并通過免疫組化的方法檢測(cè)移植局部

5、病理切片CD3+細(xì)胞浸潤(rùn)的情況，對(duì)比移植局部移植局部免疫排斥反應(yīng)的情況。
　　 結(jié)果：
　　 1．大鼠BMSCs具有與HUCMSCs相似的生長(zhǎng)周期與規(guī)律，但增殖與分化速度明顯慢于HUCMSCs，穩(wěn)定性與后者相比較差。
　　 2．在移植后一周、一個(gè)月、兩個(gè)月及三個(gè)月時(shí)，我們檢測(cè)到干細(xì)胞移植組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)大鼠靜脈血中Ⅱ-2水平較PBS組明顯升高，Ⅱ-10水平較對(duì)照組明顯下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

6、　　 3．大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植組在移植后一周、一個(gè)月、兩個(gè)月及三個(gè)月時(shí)大鼠靜脈血中Ⅱ-2水平較人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植組明顯升高，Ⅱ-10水平較對(duì)照組明顯下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4．三組在急性期（細(xì)胞移植后1周）移植局部均有大量CD3+細(xì)胞浸潤(rùn)。而移植的慢性期（細(xì)胞移植后3個(gè)月）大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植組仍存在大量CD3+細(xì)胞浸潤(rùn)，與其它兩組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)