選擇性環(huán)氧合酶-2抑制劑防治造血干細胞移植預(yù)處理誘發(fā)口腔黏膜炎的實驗研究.pdf

1、本實驗擬在已建立的CTOM大鼠模型上檢測COX-2的表達水平，并觀察選擇性COX-2抑制劑對OM的防治作用。 研究目的：探討選擇性COX-2抑制劑對CTOM的防治作用。 研究方法： 1.COX-2在CTOM過程中的表達56只雄性SD大鼠隨機抽取40只作為模型組，按本課題組前期所建立的造模方案復(fù)制CTOM動物模型。其余16只作正常對照組。每日記錄體重和口腔黏膜炎指數(shù)(oralmucositisscore，OMs)。

2、在用藥完成后12hr(即實驗開始的第3d)、36hr(即實驗開始的第4d)、第6d、7d、9d、10d、12d、14d分別處死模型組大鼠6只，對照組大鼠2只。隨機抽取部分大鼠胸骨骨髓和外周血作骨髓涂片和白細胞計數(shù)檢查骨髓抑制情況。取頰、舌部黏膜組織，部分用于病理學(xué)檢查和COX-2免疫組化染色，并按已報道的方法計算陽性細胞染色程度和百分率；部分用于COX蛋白活性檢測。 2.選擇性COX-2抑制劑塞來昔布對CTOM防治作用研究55只

3、雄性SD大鼠隨機分為：疾病預(yù)防組15只；疾病對照組15只；疾病治療組15只；正常對照組10只。疾病預(yù)防組在造模前4d開始每日灌胃給予選擇性COX-2抑制劑塞來昔布10mg/kg/d，至實驗結(jié)束。疾病治療組接受化療用藥后，于實驗第4d開始，每日灌胃給予相同劑量塞來昔布，至實驗結(jié)束。疾病對照組用于復(fù)制CTOM模型。正常對照組不予處理，常規(guī)飼養(yǎng)。每日記錄動物體重、OMS，統(tǒng)計各組生存曲線、累積生存概率和中位生存天數(shù)；按不同時點處死動物取材，作

4、組織病理學(xué)檢查和免疫組化染色。 研究結(jié)果： 1.COX-2在CTOM過程中的表達模型組動物生存狀況、生存率(80％)、體重、OMS、骨髓象、白血病計數(shù)等變化的總體情況與本課題組前期結(jié)果基本相同。在此基礎(chǔ)上，本實驗觀察到5只大鼠的OM病損出現(xiàn)在未經(jīng)搔刮的舌背和舌尖部，而且黏膜多個部位上皮松解，易撕裂出血，尤其是門齒周圍和頰部。病理檢查見潰瘍區(qū)上皮黏膜完整性破壞，棘細胞層崩解，剩余上皮全層變薄，舌部絲狀乳頭不明顯。潰瘍底部肌

5、層見灶性壞死，黏膜下層血管擴張，點狀出血；炎癥細胞在病損區(qū)散在分布。模型組標本在各時點均有不同程度的COX-2陽性染色，分數(shù)最小值為3.00±0.82(12hr)，最高分5.33±1.15(6d)；各時點間分數(shù)值無顯著性差異(P＞0.05)。COX-2陽性細胞廣泛分布于上皮和上皮下組織。在頰部潰瘍組織中，上皮細胞染色不明顯；在舌部自發(fā)潰瘍標本中舌背和舌腹黏膜上皮棘層細胞呈帶狀強陽性染色。在上皮下血管內(nèi)皮細胞、成纖維細胞和肌纖維均可見CO

6、X-2陽性染色；壞死灶和較大血管周圍還可見COX-2陽性細胞環(huán)繞。正常黏膜上皮和上皮下組織中未見COX-2陽性表達。COX-2蛋白活性在各時點內(nèi)均可檢出。第4d、6d、10d的COX-2活性分別占總COX活性的36.87％、76.45％、和55.06％。COX-1在各時點內(nèi)及正常黏膜組織中均可檢測出不同程度的表達。 2.選擇性COX-2抑制劑塞來昔布對CTOM防治作用研究疾病預(yù)防組和疾病治療組生存率顯著低于疾病對照組和正常對照組

7、(P=0.000)。疾病預(yù)防組大鼠最長生存時間僅為8d，8d累積生存概率18.75％，中位生存時間為6.83d。疾病治療組大鼠最長生存時間10d，8d累積生存概率為40.11％，中位生存時間為8.79d。疾病對照組和正常對照組間生存曲線無顯著性差異(P=0.052)；疾病預(yù)防組和疾病治療組、疾病對照組及正常對照組；疾病治療組與疾病對照組及正常對照組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義。疾病預(yù)防組大鼠的OM發(fā)生率93.33％(14/15)，且病損一開始便達

8、到2～3級，隨后病程發(fā)展迅速，到第7d累計有3只大鼠發(fā)生5級OM。疾病治療組大鼠的OM發(fā)生率為80.00％(12/15)，第4dOM發(fā)生率為66.67％(10/15)。有2只大鼠的OM在第6d緩解，未發(fā)展成潰瘍；其余的病損均未觀察到明顯愈合跡象，累計有4只大鼠的病損發(fā)展至4級(第8d)。各組的OM發(fā)生情況不相等，OM嚴重程度依次為：疾病預(yù)防組＞疾病治療組＞疾病對照組＞正常對照組。從第5d開始，各組的體重差異顯著(P＜0.05)。4組CO

9、X-2免疫組化染色分值差異顯著(P=0.000)。染色程度順序依次為疾病對照組＞疾病治療組＞疾病預(yù)防組＞正常對照組。免疫組化染色顯示疾病預(yù)防組和疾病治療組局部黏膜上皮細胞可見少量不同程度的COX-2陽性表達，染色程度適中到弱染；黏膜下僅見少量肌纖維細胞和成纖維細胞弱染；血管內(nèi)皮細胞和中性粒細胞均未見陽性染色。各組OMs與免疫組化得分間無顯著相關(guān)性。 研究結(jié)論： 1.CTOM大鼠模型口腔黏膜組織中COX-2表達上調(diào)，但與O