人胚胎血管內皮祖細胞治療動脈粥樣硬化的初步研究.pdf

1、目的：
　　 研究人胚胎血管內皮祖細胞(endothelial progenitor cells，EPCs)分離、培養(yǎng)及鑒定的方法，評價其用于治療動脈粥樣硬化的可行性，為干細胞技術治療疾病提供可靠的細胞來源。
　　 方法：
　　 1．從8-14周齡流產的人胚胎主動脈中應用膠原酶消化法分離獲得EPCs，用含有堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、表皮生長因

2、子(epidermal growth factor,EGF)和白血病抑制因子(leucocyte inhibitory factor,LIF)的低血清培養(yǎng)基體外擴增培養(yǎng)EPCs。分離培養(yǎng)的EPCs鑒定采用細胞免疫熒光染色、RT-PCR及流式細胞術，檢測EPCs細胞的特異標志CD133、CD34和血管內皮細胞生長因子受體2（vascular endothelial growth factor receptor 2，VEGFR2）。培養(yǎng)的E

3、PCs應用VEGF進行誘導分化，并評價其分化成為血管內皮細胞的能力。
　　 2．將用綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）標記的EPCs通過尾靜脈移植到apoE基因敲除小鼠動脈粥樣硬化模型中，24h后取出小鼠主動脈，鏡下觀察動脈粥樣硬化病變內膜EPCs的定位粘附情況。
　　 結果：
　　 1．分離的人胚胎主動脈EPCs表達EPCs的標志分子CD133，CD34和VEGFR2。E

4、PCs在體外特定低血清培養(yǎng)條件下表現(xiàn)很強的增殖能力，并具有攝取Ac-LDL和體外成管能力。培養(yǎng)的EPCs經過VEGF誘導后，細胞表達CD133明顯降低，表達vWF，CD31和ELAM-1增強，表明細胞分化成為血管內皮細胞。
　　 2．成功構建動脈粥樣硬化模型，并在此動脈粥樣硬化模型中，檢測到有人胚胎主動脈EPCs定位并粘附到粥樣硬化病變內膜。
　　 結論：
　　 人胚胎早期主動脈的EPCs具有很好的體外自我更新能