Mir-195參與糖尿病腎病發(fā)病的機制研究.pdf

1、第一部分STZ誘導的DBA/2小鼠早期糖尿病腎病miRNA表達譜分析
　　目的:建立小鼠1型糖尿病模型及早期糖尿病腎病模型,提取腎臟組織RNA并作microRNA芯片檢測,分析糖尿病腎病中腎小球miRNA表達譜差異。
　　方法:STZ腹腔注射誘導DBA/2小鼠I型糖尿病和糖尿病腎病,記錄血糖,血肌酐,尿素氮,24小時尿微鼉白蛋白。取左腎做病理切片行光鏡和電鏡觀察;分級篩網法分離腎小球,提取總RNA,分離短片段RNA,做miR

2、NA芯片測microRNA表達,RT-PCR驗證芯片結果;用生物信息學方法分析miRNA表達譜差異及差異miRNA調控的主要功能。
　　結果:低劑量STZ誘導DBA/2小鼠出現持續(xù)高血糖和蛋白尿。μParaflo MicroRNA基因芯片結果與RT-PCR結果一致。生物信息學分析MicroRNA基因芯片結果提示DN模型中多種MicroRNA表達上調或下調,MicroRNA-195調控BCL2基因可并參與細胞凋亡等生物學過程。

3、>　　結論:在糖尿病腎病中MicroRNA-195表達發(fā)生了變化,MicroRNA-195可能參與了糖尿病腎病的病理生理過程。
　　第二部分Mir-195調控糖尿病腎病足細胞的機制
　　目的:觀察高糖培養(yǎng)下足細胞MicroRNA-195表達及MicroRNA-195對足細胞結構和功能的影響,探討糖尿病腎病模型中MicroRNA-195引起的足細胞損傷和尿白蛋白排泄間的關系。
　　方法:高糖培養(yǎng)永生化小鼠足細胞系,用Mi

4、croRNA-195擬似劑或拈抗劑刺激細胞,檢測凋亡相關基因、蛋白表達和細胞凋亡率,檢測細胞骨架變化和特異性功能蛋白表達。分析糖尿病腎病模型中腎小球MicroRNA-195表達和尿蛋白定量間的關系。
　　結果:高糖培養(yǎng)下的足細胞表達MicroRNA-195明顯增加。MicroRNA-195可以促進足細胞凋亡。F-actin染色提示MicroRNA-195可以導致足細胞F-actin重排、細胞骨架改變。在DN模型中,微量蛋白尿期Mi

5、croRNA-195水平已開始上升。
　　結論:MicroRNA-195表達增加可促進足細胞凋亡,損傷足細胞引起蛋白尿。MicroRNA-195有可能成為篩查早期糖尿病腎病的診斷指標。
　　第三部分 Mir-195調控糖尿病腎病系膜細胞的機制
　　目的:觀察高糖培養(yǎng)下系膜細胞MicroRNA-195表達及MicroRNA-195對系膜細胞結構和功能的影響,探討糖尿病腎病模型中MicroRNA-195引起的系膜細胞損傷和

6、腎臟病理間的關系。
　　方法:高糖培養(yǎng)永生化小鼠系膜細胞系,用MicroRNA-195擬似劑或拈抗劑刺激細胞,檢測細胞增殖、肥大、凋亡率和細胞吞噬能力。分析糖尿病腎病模型中腎小球MicroRNA-195表達和腎臟病理切片中腎小球直徑、系膜細胞積分、細胞外基質積聚的關系。
　　結果:高糖培養(yǎng)組系膜細胞MicroRNA-195表達較低糖培養(yǎng)組低。MicroRNA-195抑制劑刺激使高糖培養(yǎng)條件下系膜細胞凋亡率下降且具有量效關系。