樹突狀細胞在布魯氏菌疫苗誘導免疫應答中的作用研究.pdf

1、布魯氏菌病是由布魯氏菌引起的一種人獸共患傳染病，主要經消化道、呼吸道和泌尿生殖黏膜以及皮膚傷口感染，引起母畜流產和人的“波浪熱”等疾病。大量研究證明，巨噬細胞是布魯氏菌的易感細胞。巨噬細胞被布魯氏菌感染后，由于布魯氏菌在其胞內生存并大量繁殖，使它的抗原提呈能力喪失，不能提呈布魯氏菌的抗原，從而使免疫功能遭到破壞，導致持續(xù)性感染的發(fā)生。因此，如何幫助患病動物建立有效的免疫應答機制是當前一個重要的研究課題。 適應性免疫應答的啟動需要

2、樹突狀細胞(dendritic cells，DCs)的抗原提呈，不僅如此，DCs還能交叉提呈非復制性抗原，故被稱為機體最強大的抗原提呈細胞，但目前尚不清楚DCs是否提呈布魯氏菌抗原及其可能的機制。 為探明陰道黏膜DCs是否參與布魯氏菌抗原提呈，研究者模擬自然感染途徑給BALB/c小鼠陰道接種了布魯氏菌凍干疫苗，然后，比較不同時間內陰道引流淋巴結內DCs的動力學變化。結果發(fā)現，與對照組相比，接種布魯氏菌凍干疫苗12h后，小鼠髂內淋

3、巴結中的DCs數量開始增多，散在分布于皮質區(qū)；48h后陰道黏膜DCs向髂內淋巴結的遷移達到頂峰，在淋巴結T細胞區(qū)聚集，此時細胞密度較大，多個細胞簇擁成團；72h后雖然DCs分布區(qū)域加大，但細胞密度相對于48h降低，大量DCs呈單個分布。而對照組未見類似改變。同時，用ELISA法對陰道接種布魯氏菌凍干疫苗的小鼠血清中IFN-γ平進行了檢測，結果顯示，接種疫苗12h后，小鼠血清內的IFN-γ含量就開始升高，但與對照組相比差異不顯著(P>0.

4、05)，而48h后，接種疫苗組小鼠血清內的:IFN-γ含量明顯升高，與對照組相比，差異顯著(22.2140±2.3056pg/mL，P<0.05)。在接種72h后，接種疫苗組小鼠血清內的IFN-γ含量達到最高峰，與對照組相比，差異極顯著(23.6507±1.4727 pg/mL，P＜0.01)。以上結果表明，陰道黏膜DCs就是布魯氏菌抗原的提呈細胞。 由于巨噬細胞是野生型或疫苗布魯氏菌的主要吞噬細胞，所以，為了進一步探討DCs提

5、呈布魯氏菌抗原的機制，研究者采取了清除BALB/c小鼠陰道巨噬細胞的處理方法，以便為樹突狀細胞提供更多捕獲布魯氏菌抗原的機會，并模擬自然感染途徑，陰道接種了布魯氏菌疫苗，然后，比較不同時間內陰道引流淋巴結內DCs的動力學變化。對照組(即陰道滴注PBS-liposome組)接種布魯氏菌凍干疫苗12h后，小鼠髂內淋巴結中DCs數量開始增加，散在分布于皮質區(qū)。24h后淋巴結內DCs散在分布于副皮質區(qū)，在48h后，DCs向髂內淋巴結副皮質區(qū)的遷

6、移達到頂峰，至72h，髂內淋巴結內DCs的數量有所下降，在皮質區(qū)和副皮質區(qū)內呈現散在分布狀。實驗組(即陰道滴注Clodronate-liposome組)接種布魯氏菌凍干疫苗，髂內淋巴結內DCs的數量沒有明顯變化。同時，用ELISA法對陰道接種布魯氏菌凍干疫苗不同時間的小鼠血清IFN-γ和IL-4水平均進行了檢測。結果顯示:對照組的小鼠接種疫苗12h后，血清內的IFN-γ含量有所升高，但與PBS組相比其差異均不顯著(P>0.05)；而24

7、h后，接種疫苗組小鼠血清內的IFN-γ含量明顯升高，與PBS組相比，差異顯著(48.7508±2.4373 pg/mL,P<0.05)；48h后含量達到最大，差異極顯著(52.3050±2.3262pg/mL，P<0.01)；而在接種72h后，接種疫苗組小鼠血清內的IF-γ含量雖降低，但與PBS組相比，差異還是顯著(51.5511±2.0772 pg/mL，P<0.05)。實驗組小鼠接種疫苗12h、24h、48h和72h后，血清內的IF

8、N-γ含量升高，但與PBS組相比其差異均不顯著(P>0.05)。在對照組和實驗組中，接種疫苗12h-72h組小鼠血清內的IL-4含量與PBS組相比，差異均不顯著(P>0.05)。以上結果說明，DCs雖然是布魯氏菌的抗原提呈細胞，但其抗原提呈過程具有巨噬細胞依賴性特征，并且主要引起Th1型免疫應答。 為闡明DCs提呈布魯氏菌抗原對巨噬細胞的依賴本質，研究者進行了體外布魯氏菌疫苗荷載BALB/c小鼠腹腔巨噬細胞的試驗(500CFU/