

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、帕金森病(Parkinson'sdisease,PD)是常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)慢性退行性疾病,臨床主要表現(xiàn)為靜止性震顫、運(yùn)動(dòng)徐緩、肌僵直以及平衡功能失調(diào)等癥狀,病情呈慢性進(jìn)行性加重。在55歲以上人群中發(fā)病率約為2﹪,其中95﹪的病例為散發(fā)性。遺傳因素和環(huán)境因素被認(rèn)為是PD的主要致病因素,其典型病理和生化特征為黑質(zhì)致密部多巴胺能神經(jīng)元變性、缺失,Lewy's小體的出現(xiàn)及紋狀體多巴胺(dopamine,DA)含量顯著降低。但DA能神經(jīng)元變性、死
2、亡的機(jī)制還未闡明。目前認(rèn)為氧化應(yīng)激、興奮性毒性、神經(jīng)炎性反應(yīng)和線粒體功能障礙等是導(dǎo)致DA能神經(jīng)元死亡的主要機(jī)制。特別是腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞活化所介導(dǎo)的神經(jīng)炎性病理反應(yīng),是疾病發(fā)生的早期機(jī)制之一,并加重其他因素所導(dǎo)致的DA能神經(jīng)元死亡,促進(jìn)了疾病的發(fā)生發(fā)展。目前,臨床主要應(yīng)用L-DOPA替代治療或DA受體激動(dòng)劑改善PD癥狀。但這些藥物并不能阻止疾病的進(jìn)展,且長(zhǎng)期使用易出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)等嚴(yán)重不良反應(yīng)。因此,進(jìn)一步闡明PD的病因與發(fā)病機(jī)制、
3、探索有效的PD治療新靶標(biāo)和治療新藥具有重大意義。包括本實(shí)驗(yàn)室在內(nèi)的國(guó)內(nèi)外研究表明,調(diào)節(jié)腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞活化所介導(dǎo)的神經(jīng)炎性病理反應(yīng)是神經(jīng)保護(hù)的重要新策略。 ATP敏感性鉀通道(ATP-sensitivepotassiumchannel,KATP)是一種耦聯(lián)細(xì)胞代謝和電活動(dòng)、以細(xì)胞內(nèi)的ATP/ADP水平為門(mén)控因素、非電壓依賴性的特殊鉀離子通道。近年來(lái),包括本實(shí)驗(yàn)室在內(nèi)的研究表明:1)KATP特別是線粒體KATP(mitochondr
4、ialATP-sensitivepotassiumchannel,mito-KATP)是重要的神經(jīng)保護(hù)靶標(biāo),不僅是急性缺血缺氧、氧化應(yīng)激等病理因素所致?lián)p傷時(shí)的重要內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制,而且在神經(jīng)元受損中、后期的神經(jīng)炎性病理反應(yīng)以及神經(jīng)元凋亡中也發(fā)揮重要的保護(hù)作用;2)KATP與PD的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),是探討PD發(fā)病機(jī)制和研發(fā)治療藥物的新靶標(biāo);3)KATP不僅直接對(duì)神經(jīng)元發(fā)揮保護(hù)作用,而且能通過(guò)調(diào)節(jié)腦內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞功能發(fā)揮對(duì)神經(jīng)元
5、的進(jìn)一步保護(hù)作用。新型KATP開(kāi)放劑埃他卡林(iptakalim,IPT)是我國(guó)學(xué)者自行設(shè)計(jì)、合成的脂肪仲胺類(lèi)小分子化合物,易透過(guò)血腦屏障,使得在整體水平上評(píng)價(jià)KATP開(kāi)放劑的神經(jīng)保護(hù)作用成為可能。本實(shí)驗(yàn)室前期研究顯示,IPT不僅對(duì)急慢性腦缺血損傷具有確切的神經(jīng)保護(hù)作用,而且對(duì)應(yīng)用多種神經(jīng)毒素如6-羥基多巴(6-hydroxydopamine,6-OHDA)、魚(yú)藤酮(rotenone,Rot)、N-甲基-4-苯基吡啶離子(1-methy
6、-4-phenyl-2,3-dihydropyridiniumion,MPP+)等制備的PD整體動(dòng)物模型和離體細(xì)胞模型均具有神經(jīng)保護(hù)作用。然而,KATP除了直接保護(hù)神經(jīng)元外,還可能通過(guò)調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞功能發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。本文旨在從離體和在體水平系統(tǒng)研究KATP對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響,闡明KATP對(duì)神經(jīng)炎性反應(yīng)的調(diào)節(jié)在其神經(jīng)保護(hù)作用中的重要作用,也為將IPT發(fā)展為PD治療新藥積累必要的學(xué)術(shù)與實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 本文工作第一部
7、分首先鑒定了原代培養(yǎng)的大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞上KATP的表達(dá),在此基礎(chǔ)上研究KATP對(duì)rotenone誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞活化的調(diào)節(jié)及其機(jī)制;第二部分進(jìn)一步從在體水平研究KATP對(duì)rotenone致PD模型大鼠腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞活化介導(dǎo)的神經(jīng)炎性反應(yīng)的調(diào)節(jié)及其神經(jīng)保護(hù)作用。 第一部分小膠質(zhì)細(xì)胞上ATP敏感性鉀通道的表達(dá)及其對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞活化的調(diào)節(jié) 目的:研究原代培養(yǎng)的大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞是否表達(dá)KATP,在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究KATP對(duì)roten
8、one誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞活化的調(diào)節(jié)作用及相關(guān)機(jī)制。 方法:應(yīng)用westernblotting、RT-PCR法檢測(cè)原代培養(yǎng)的大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞是否表達(dá)KATP;從形態(tài)學(xué)及免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞的活化;ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-α的含量,放射免疫測(cè)定法(RIA)檢測(cè)PGE2的含量;應(yīng)用JC-1熒光探針檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞線粒體膜電位;Westernblotting檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞p38/JNKMAPK磷酸化水平。 結(jié)果
9、:1)原代培養(yǎng)的大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)KATP,其亞基組成為Kir6.1、SUR2A/2B。2)rotenone(10nM)可顯著誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞活化,形態(tài)學(xué)上呈阿米巴樣改變,ED1表達(dá)上調(diào),致炎因子TNF-α和PGE2生成增加;10μMIPT或100μMdiazoxide預(yù)處理均能顯著抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的活化,抑制ED1的表達(dá)與TNF-α和PGE2的生成增加。250μM的mito-KATP阻斷劑5-HD可以取消IPT和diazoxide的上述效
10、應(yīng)。3)rotenone能誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞線粒體膜電位水平下降,以及p38/JNKMAPK磷酸化水平增加;IPT或diazoxide能逆轉(zhuǎn)rotenone的上述作用,5-HD可以取消IPT和diazoxide的上述作用。 結(jié)論:小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)KATP,其亞基組成為Kir6.1、SUR2A/R2B;KATP開(kāi)放能抑制rotenone誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞活化及致炎因子生成增加,其作用機(jī)制與其穩(wěn)定線粒體膜電位及抑制p38/JNK信號(hào)通路激活
11、有關(guān)。 第二部分ATP敏感性鉀通道對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的腦內(nèi)神經(jīng)炎性反應(yīng)的調(diào)節(jié) 目的:研究KATP對(duì)rotenone致帕金森病模型大鼠腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞活化及神經(jīng)炎性病理反應(yīng)的影響,進(jìn)一步探討KATP的神經(jīng)保護(hù)作用及機(jī)制。 方法:1)動(dòng)物給藥處理:SD大鼠給予IPT(1.5或3.0mg·kg-1·day-1)或mito-KATP開(kāi)放劑diazoxide(1.5mg·kg-1·day-1)連續(xù)灌胃三天,自第四天起,于每天I
12、PT或diazoxide灌胃后1h背部皮下注射rotenone(2.5mg·kg-1·day-1),連續(xù)給藥4周,統(tǒng)計(jì)各組大鼠死亡率并進(jìn)行行為學(xué)研究;2)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)腦內(nèi)黑質(zhì)部位DA能神經(jīng)元存活情況(TH染色),同時(shí)檢測(cè)黑質(zhì)部位小膠質(zhì)細(xì)胞活化情況(OX-42和ED1染色);3)RT-PCR法檢測(cè)腦紋狀體和黑質(zhì)中TNF-α和COX-2mRNA表達(dá)水平變化。 結(jié)果:1)單獨(dú)給予rotenone組大鼠死亡率明顯增加至40﹪,前爪
13、移動(dòng)潛伏期均值延長(zhǎng)至42s,提示大鼠出現(xiàn)明顯的肌僵直癥狀;不同濃度IPT和diazoxide均可顯著降低大鼠死亡率,緩解肌僵直癥狀。2)rotenone能顯著誘導(dǎo)大鼠黑質(zhì)DA能神經(jīng)元變性死亡(TH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組相比下降68.1﹪),并伴隨著小膠質(zhì)細(xì)胞活化顯著增加,以及TNF-α和COX-2mRNA表達(dá)水平增加。3)不同濃度IPT和diazoxide均可促進(jìn)DA能神經(jīng)元存活(TH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組相比分別下降22.2﹪、15.8﹪和1
14、9.7﹪),并抑制rotenone誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞活化及TNF-α和COX-2mRNA表達(dá)增加。 結(jié)論:系統(tǒng)給予KATP開(kāi)放劑能顯著緩解rotenone誘導(dǎo)的大鼠帕金森樣癥狀,促進(jìn)黑質(zhì)DA能神經(jīng)元存活;KATP開(kāi)放劑的神經(jīng)保護(hù)作用與其抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化介導(dǎo)的神經(jīng)炎性病理反應(yīng)密切相關(guān)。本文工作的主要?jiǎng)?chuàng)新之處在于: 1.發(fā)現(xiàn)原代培養(yǎng)的大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)KATP,其亞基組成為Kir6.1和SUR2A/2B,并系統(tǒng)研究、闡明了K
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- ATP敏感性鉀通道對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖調(diào)控機(jī)制的研究.pdf
- ATP敏感性鉀通道對(duì)大鼠前脂肪細(xì)胞增殖分化影響及其機(jī)制.pdf
- 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞在IBS內(nèi)臟高敏感性反應(yīng)中作用機(jī)制研究.pdf
- 遠(yuǎn)端創(chuàng)傷和缺血對(duì)心肌細(xì)胞膜ATP敏感性鉀離子通道表達(dá)的影響.pdf
- 缺氧-藥物后處理對(duì)大鼠心肌細(xì)胞ATP敏感性鉀通道亞基的影響.pdf
- 姜黃素通過(guò)ATP敏感性鉀通道抑制胃癌細(xì)胞增殖的機(jī)制研究.pdf
- 埃他卡林對(duì)心肌和平滑肌ATP敏感性鉀通道基因表達(dá)的調(diào)節(jié)及其組織選擇性的研究.pdf
- 在心肌缺血-再灌注中IMD對(duì)ATP敏感性鉀通道.pdf
- 埃他卡林對(duì)ATP敏感性鉀通道選擇性作用的研究.pdf
- ATP敏感性鉀通道和帕金森病的相關(guān)性研究.pdf
- ATP敏感性鉀通道開(kāi)放劑對(duì)離體大鼠心臟的保護(hù)作用.pdf
- 開(kāi)放ATP敏感性鉀通道對(duì)哮喘大鼠氣道重塑作用機(jī)制的研究.pdf
- ATP敏感性鉀通道開(kāi)放劑對(duì)尿酸腎臟損傷的保護(hù)作用及其分子機(jī)制的研究.pdf
- 鈣激活鉀通道及ATP敏感性鉀通道在缺氧性肺血管收縮中的作用.pdf
- 線粒體ATP敏感性鉀通道在腺苷抗心肌細(xì)胞肥大中的作用.pdf
- 原發(fā)性高血壓中ATP敏感性鉀通道表達(dá)和功能的隨齡改變研究.pdf
- 肌漿網(wǎng)鈣-ATP酶及線粒體ATP敏感性鉀通道介導(dǎo)的預(yù)適應(yīng)心肌保護(hù)作用.pdf
- 線粒體ATP敏感性鉀通道及其開(kāi)放劑抗心肌缺血作用的研究.pdf
- ATP敏感性鉀通道對(duì)缺氧條件下海馬CA1區(qū)神經(jīng)元保護(hù)作用及其機(jī)制的研究.pdf
- 右美托咪定對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞膜ATP敏感性鉀通道電流的影響.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論