胎盤組織源單個核細胞免疫活性的研究.pdf

1、研究目的；近年來,造血干細胞移植成為治療惡性血液病、再生障礙性貧血、自身免疫性疾病,某些遺傳性疾病及實體瘤的一種重要手段.據(jù)有關(guān)資料顯示,僅我國就有400多萬各類疾病患者等待造血干細胞移植,而造血干細胞的來源卻很有限.骨髓、外周血和臍血是目前造血干細胞的主要來源,骨髓和外周血造血干細胞移植要求HLA配型完全一致,這即使是同胞間也只有25﹪的機率,在非血緣關(guān)系的人群中僅有1/400-1/10000的可能性,遠遠不能滿足臨床治療的需要;臍血

2、雖免疫原性較弱,移植后移植物抗宿主病(GVHD)的發(fā)生率低,但單份臍血中所含的造血干細胞數(shù)量有限,難以使一個成人獲得造血干細胞重建,需要擴增后才能用于成人.所以尋找新的造血干細胞來源是個極待解決的問題.已有研究證實:胎盤中含有較多的造血干細胞,胎盤組織有支持造血干細胞生存的微環(huán)境.這表明通常丟棄的胎盤也有望成為HSC移植的資源.但胎盤組織中造血干細胞的含量有限,故胎盤造血干細胞進行體外擴增成為胎盤造血干細胞用于移植的一個前提,國內(nèi)外已有

3、相關(guān)報道.移植治療后GVHD是影響移植治療效果的重要原因之一,本研究比較了擴增后的胎盤及臍血單個核細胞和動員后的外周血的免疫活性,以了解胎盤作為干細胞源用于移植時GVHD的發(fā)生情況,為胎盤組織源造血干細胞用于移植提供理論依據(jù). 對象與方法；(一)對象 1.胎盤組織和與其相對應(yīng)的臍血8份:在無菌條件下,分別采集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院足月健康順產(chǎn)分娩孕婦的胎盤及與其相對應(yīng)的臍血. 2.外周血8份:在無菌條件下采集鄭州大學(xué)第一附

4、屬醫(yī)院和河南省腫瘤醫(yī)院血液科干細胞移植健康供者的經(jīng)G-CSF動員4-5后的外周血. (二)方法 1.單個核細胞(MNC)制備:剪切胎盤組織呈1-2mm<'3>大小的組織塊,用酶消化的方法經(jīng)320目的細胞篩過濾制備胎盤組織源單個細胞懸液;用淋巴細胞分離液分別分離胎盤組織源、臍血源的MNC. 2.胎盤和臍血MNC的體外培養(yǎng):將分離的胎盤MNC、臍血MNC用DMEM培養(yǎng)液懸浮,加入刺激因子,置37℃、體積濃度為5﹪CO

5、<,2>、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7天. 3.用淋巴細胞分離液將培養(yǎng)后的胎盤和臍血細胞再次分離MNC,同時分離動員后的外周血的MNC,并為后續(xù)實驗調(diào)好細胞濃度. 4.采用CCK-8檢測混合淋巴細胞反應(yīng)中胎盤、臍血和外周血三種來源細胞的增殖情況;采用流式細胞儀技術(shù)檢測胎盤、臍血和外周血三種來源細胞中CD<,3>、CD<,19>、CD<,16>、CD<,56>、HLA-DR的表達. 結(jié)果 1.單向混合淋巴細胞反

6、應(yīng)混合淋巴細胞反應(yīng)中,擴增后的胎盤MNC組的細胞增殖顯著低于其他兩組(P<0.001),擴增后的臍血MNC組的細胞增殖顯著高于擴增后的胎盤MNC,但卻顯著低于動員后的外周血(P<0.001). 2.表型分析擴增后的胎盤MNC中T淋巴細胞(CD<,3><'+>細胞)、B淋巴細胞(CD<,19><'+>細胞) 比例少于擴增后的臍血MNC和動員后的外周血,與擴增后臍血MNC和動員后的外周血均有顯著差異.擴增后的胎盤MNC中NK細胞(C

7、D<,16><'+>CD<,56><'+>細胞)和HLA-DR+細胞比例最高,與擴增后臍血MNC和動員后的外周血有顯著差異;臍血中NK細胞的含量最少. 結(jié)論 1.單向混合淋巴細胞培養(yǎng)中,以擴增后的胎盤MNC組的細胞增殖最低,表明擴增后的胎盤MNC免疫活性最低. 2.擴增后的胎盤MNC中CD<,3><'+>細胞,CD<,19><'+>細胞的比例最低,表明擴增后的胎盤MNC免疫活性最低. 3.擴增后的胎盤MN