水楊柳中新皂苷的分離及其對高尿酸血癥影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:建立水柳皂苷含量的測定方法對水楊柳中的水柳皂苷提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)化并研究水柳皂苷在體內(nèi)對高尿酸血癥動物的影響。
　　 方法:運(yùn)用高效液相色譜建立了測定新的天然化合物水柳皂苷含量的方法;運(yùn)用均勻設(shè)計方法優(yōu)選影響水楊柳中總浸膏提取率3個因素:提取時間、乙醇濃度和固液比的最佳工藝條件;采用正交設(shè)計法優(yōu)選影響總浸膏中總甾體皂苷提取率4個因素:提取時間、溶劑類型、提取溫度和溶劑用量的最佳工藝條件;采用小鼠灌胃腺嘌呤聯(lián)合腹腔注射尿酸酶

2、抑制劑氧嗪酸鉀建立高尿酸血癥動物模型,給予高、中、低劑量水柳皂苷,以別嘌呤醇為陽性對照藥,分析模型動物的血清尿酸含量、黃嘌呤氧化酶活力、肝臟總蛋白含量、肝酯酶mRNA表達(dá)量、血脂以及血糖含量及試驗(yàn)藥物對其影響,并對實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行病理學(xué)分析,觀察其形態(tài)學(xué)改變。
　　 結(jié)果:建立測定水楊柳提取物中水柳皂苷的高效液相色譜法條件為:采用RP-HPLC法,色譜柱為HYPERSILBDS-C18色譜柱(200mm×4.6mm,5μm);流動相

3、為乙腈:水=75:25;流速為1.0ml/min;檢測波長為203nm;柱溫為30℃;柱壓為10.0Mpa,該方法的線性范圍為5～500μg/ml(r=0.9998);平均加樣回收率為99.44％,RSD為0.52％(n=15)。均勻設(shè)計法得到水楊柳中總浸膏的提取最佳工藝條件為:采用滲漉法用12倍量的濃度為75％乙醇提取7小時,每1g水楊柳可以得到0.13g水楊柳總浸膏。正交設(shè)計法得到總浸膏中總甾體皂苷的提取最佳工藝為:以16倍體積的正

4、丁醇為溶劑熱回流提取4小時,提取溫度為70℃,每1g水楊柳可以得到0.138mg水柳皂苷。造模第7天,模型組動物的血尿酸水平和黃嘌呤氧化酶活性顯著高于正常對照組(p＜0.01),且病理檢查發(fā)現(xiàn)模型組的腎臟出現(xiàn)不同程度的損傷;給藥第21天,模型組動物的血尿酸水平和黃嘌呤氧化酶活性顯著高于正常對照組、水柳皂苷高、中、低劑量藥物組和陽性藥物組(p＜0.01),且不同劑量組之間存在劑量效應(yīng)關(guān)系,高劑量組和低劑量組差異顯著(p＜0.01):肝臟脂

5、肪酶的tuRNA表達(dá)分析提示模型組的表達(dá)量高于其它各實(shí)驗(yàn)組;血脂含量分析發(fā)現(xiàn)模型組血脂顯著高于正常對照組、高、中、低劑量組以及陽性藥物對照組(p＜0.01),且除了低劑量組血脂高于正常對照組(p＜0.01),其它組與正常組無差異(p＞0.05);實(shí)驗(yàn)第21天發(fā)現(xiàn)各組小鼠血糖濃度差異不顯著(p＞0.05);肝臟總蛋白含量模型組顯著高于正常對照組、高、中、低劑量組以及陽性藥物對照組(p＜0.01)。
　　 結(jié)論:運(yùn)用高效液相測定提取