CD137信號對CIK細胞增殖和功能調節(jié)的研究.pdf

1、共刺激分子CD137是近年新發(fā)現(xiàn)的TNFR超家族的新成員，其主要表達在活化的T細胞、自然殺傷細胞(natural killer，NK cells)和樹突狀細胞(dendritic cells，DCs)表面。研究發(fā)現(xiàn)CD137與其配體結合后，介導的共刺激信號可促進T細胞和NK細胞增殖、誘導細胞因子的分泌以及減少活化誘導的細胞死亡(activation-induced cell death，AICD)，增加細胞存活能力。細胞因子誘導的殺傷細

2、胞(cytokineinduced killer cells，CIK細胞)是一種新型的具有廣譜殺瘤活性的非主要組織相容性復合物(non-major histocompatibility complex，MHC)限制性的免疫效應細胞。但目前CIK細胞的擴增效率和治療實體瘤的療效仍有待進一步提高。CIK細胞為一群異質細胞群，包括CD3+CD56+細胞和CD3+CD8+細胞，其中CD3+CD56+細胞是CIK細胞發(fā)揮直接和間接抗腫瘤作用最主要

3、的效應細胞。因此通過提高CIK細胞中CD3+CD56+細胞的數(shù)量和抗腫瘤的活性可有效提高CIK細胞過繼免疫治療的療效。然而目前CD137信號對CD3+CD56+細胞亞群的功能調節(jié)國內外未見報道。在本研究中，通過CD137mAb激活CD137共刺激信號通路，可以顯著提高CIK細胞的增殖能力和殺傷活性。在此基礎上，探討CD137信號對CIK細胞功能的調節(jié)機制。本實驗結果為提高CIK細胞治療實體瘤的療效提供新的理論依據(jù)。 目的：探討C

4、D137信號對健康人和肺癌患者外周血來源的CIK細胞的擴增和功能調節(jié)作用。 方法：分離健康人和肺癌患者外周血單個核細胞(peripheral bloodmononuclear cells，PBMCs)，實驗組在常規(guī)CIK培養(yǎng)體系中加入CD137單克隆抗體(monoclonal antibody，mAb)，即CD137-CIK組；對照組在常規(guī)CIK培養(yǎng)體系中加入鼠IgG1同型對照，即IgG1-CIK組。健康人CIK細胞：(1)苔盼

5、藍拒染法細胞計數(shù)分析細胞增殖；(2)LDH酶釋放法檢測CIK細胞對A549細胞殺傷活性：(3)AmexmV-FITC/PI試劑盒檢測CIK細胞凋亡率；(4)流式細胞術檢測CIK細胞表型分布及CD3+CD56+細胞內細胞因子及其表面NK細胞受體(NK cell receptor,NKR)的表達；(5)CIK細胞和CD4+Th0細胞共培養(yǎng)后，流式細胞儀分析CD4+T細胞內IFN-γ和IL-4的表達水平。肺癌患者CIK細胞：(1)流式細胞術分

6、析CIK細胞表型；(2)LDH酶釋放法檢測CIK細胞對A549細胞殺傷活性。 結論：CD137共刺激信號可有效的提高健康人和肺癌患者外周血中CIK細胞的擴增效率并增強CIK細胞體外非MHC限制性殺傷腫瘤細胞的能力；同時CD137信號通過提高CD3+CD56+細胞分泌Th1類細胞因子的能力，促使CIK細胞誘導CD4+Th0細胞向Th4方向分化，從而實現(xiàn)輔助激活體內細胞毒性T淋巴細胞(cytotoxie T lymphocyte，C