C-EBPβ在SLE患者外周血單一核細(xì)胞中表達(dá)及其調(diào)節(jié)的初步研究.pdf

1、背景:
　　系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是一種涉及多種免疫過(guò)程的自身免疫性疾病，其主要特點(diǎn)為自身抗體的產(chǎn)生，持續(xù)性的慢性炎癥反應(yīng)及多個(gè)靶器官器官損傷。對(duì)于其病因目前尚未明確。越來(lái)越多的研究關(guān)注到天然免疫在SLE疾病發(fā)病機(jī)制中的作用。其中Toll樣受體可以通過(guò)識(shí)別自身核酸、激活核轉(zhuǎn)錄因子kappa B(nuclear factor kappa B，NF-κB)及其他炎癥信號(hào)通路來(lái)

2、促進(jìn)加重SLE。許多調(diào)節(jié)或介導(dǎo)炎癥的因子參與Toll樣受體信號(hào)通路，包括CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白β(CCAAT/enhancer binding proteinβ，C/EBPβ)，腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白3(tumornecrosis factor alpha-induced protein3，TNFAIP3)及TNFAIP3相互作用蛋白1(TNFAIP3interacting protein1,TNIP1)。
　　C/EBPβ是

3、一種真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，在細(xì)胞分化、腫瘤發(fā)生、免疫反應(yīng)等多種生理和病理過(guò)程中具有重要作用。TNFAIP3及TNIP1基因通過(guò)全基因組關(guān)聯(lián)分析(genome-wide association study，GWAS)被鑒定為SLE易感基因，已經(jīng)證實(shí)多個(gè)種族人群中TNFAIP3和TNIP1多個(gè)位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性（single-nucleotidepolymorphisms，SNPs）與SLE的遺傳易感性顯著相關(guān)。在巨噬細(xì)胞中C/EBPβ可

4、與TNFAIP3基因的啟動(dòng)子結(jié)合，并增加TNFAIP3 mRNA的表達(dá)。而在TNIP1基因敲除小鼠中，經(jīng)典的炎癥信號(hào)通路NF-κd和絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated proteinkinase，MAPK)信號(hào)通路未受影響，C/EBPβ功能蛋白亞型LAP(liver-enriched activatingprotein)及其靶基因產(chǎn)物(Csf3、Nos2及S100a8)表達(dá)卻顯著增加，同時(shí)出現(xiàn)狼瘡樣表現(xiàn)。
　　

5、因此，C/EBPβ可能參與SLE的發(fā)病過(guò)程，并且在SLE中TNFAIP3、TNIP1和C/EBPβ存在相互的聯(lián)系。但是目前C/EBPβ在SLE患者中的表達(dá)及作用，以及在SLE發(fā)病過(guò)程中TNFAIP3、TNIP1和C/EBPβ相互關(guān)聯(lián)情況尚不完全明確。
　　目的:
　　探討SLE患者PBMC中C/EBPβ、TNFAIP3和TNIP1的表達(dá)及其與疾病活動(dòng)的相關(guān)性，SLE患者血漿對(duì)單核巨噬細(xì)胞中C/EBPβ表達(dá)的影響，以及單核細(xì)胞

6、中TNFAIP3和TNIP1對(duì)C/EBPβ表達(dá)調(diào)節(jié)。
　　方法:
　　通過(guò)定量PCR(Q-PCR)和蛋白質(zhì)印跡法(western blot，WB)檢測(cè)SLE患者和正常對(duì)照外周血單一核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)中C/EBPβ、TNFAIP3和TNIP1 mRNA和蛋白表達(dá)，并分析C/EBPβ mRNA表達(dá)與疾病活動(dòng)評(píng)分和TNFAIP3/TNIP1 mRNA表達(dá)的相關(guān)性;

7、通過(guò)Q-PCR和WB檢測(cè)SLE患者和正常對(duì)照血漿刺激由THP-1細(xì)胞誘導(dǎo)出的單核巨噬細(xì)胞后C/EBPβ mRNA和蛋白的表達(dá);最后通過(guò)TNFAIP3小干擾RNA（siRNA）轉(zhuǎn)染和TNIP1干擾慢病毒感染THP-1細(xì)胞，用Q-PCR和WB檢測(cè)C/EBPβ、TNFAIP3和TNIP1蛋白表達(dá)水平;采用GraphPad Prism5.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件組間差異通過(guò)Mann-Whitney檢驗(yàn)或t檢驗(yàn)，其結(jié)果表示為(x)±SEM，使用Spearma

8、n相關(guān)性分析法進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　結(jié)果:
　　SLE患者PBMC中C/EBPβ mRNA表達(dá)較正常對(duì)照組顯著增高(p＜0.05)。進(jìn)一步比較發(fā)現(xiàn):高ANA滴度(≥1∶160)患者較低ANA滴度(≤1∶80)患者PBMC C/EBPβmRNA表達(dá)量增高(p＜0.05);抗Sm抗體陽(yáng)性患者較陰性患者PBMC C/EBPβ mRNA表達(dá)量增高(p＜0.05);抗nRNP抗體陽(yáng)性患者較陰性患者PBMC C/EBPβ mRNA表達(dá)量

9、增高(p＜0.01)。其余自身抗體陽(yáng)性患者與陰性患者PBMC C/EBPβ mRNA表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。分析發(fā)現(xiàn):SLE患者PBMC中C/EBPβ mRNA表達(dá)量與疾病活動(dòng)度SLEDAI評(píng)分呈正相關(guān)(p＜0.05，r＞0);與患者補(bǔ)體C3、C4水平呈顯著負(fù)相關(guān)(p＜0.05，r＜0)。其余指標(biāo)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性。SLE患者PBMC中C/EBPβ mRNA表達(dá)與TNFAIP3和TNIP1 mRNA表達(dá)正相關(guān)(p＜0.05，r＞0)。SLE患者

10、PBMC中C/EBPβLAP表達(dá)較正常對(duì)照顯著增高(p＜0.01);SLE患者PBMC中C/EBPβ LIP、TNIP1和TNFAIP3蛋白表達(dá)水平較正常對(duì)照降低(p＜0.05)。SLE患者較正常對(duì)照血漿刺激單核巨噬細(xì)胞后C/EBPβ mRNA表達(dá)顯著增高(p＜0.01);SLE患者血漿刺激單核巨噬細(xì)胞后C/EBPβ LAP表達(dá)較正常對(duì)照增高(p＜0.05)，C/EBPβ LIP表達(dá)無(wú)明顯差異(p＞0.05)。經(jīng)TNIP1干擾后THP-

11、1細(xì)胞TNIP1蛋白表達(dá)較未干擾的THP-1細(xì)胞明顯降低(p＜0.01)，C/EBPβ LAP蛋白表達(dá)較未干擾的THP-1細(xì)胞升高(p＜0.05);TNFAIP3干擾后THP-1細(xì)胞TNFAIP3蛋白表達(dá)較未干擾的THP-1細(xì)胞降低(p＜0.05)，C/EBPβ LAP蛋白表達(dá)較未干擾的THP-1細(xì)胞升高(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.C/EBPβ mRNA在SLE患者PBMC中表達(dá)升高，與疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，并高

12、表達(dá)于特征性抗體陽(yáng)性的SLE患者。而且SLE患者PBMC中C/EBPβ蛋白LAP表達(dá)升高，LIP蛋白表達(dá)降低。提示C/EBPβ參與SLE的發(fā)病過(guò)程。
　　2.SLE患者PBMC中C/EBPβ mRNA表達(dá)與TNIP1/TNFAIP3 mRNA表達(dá)成正相關(guān)，而PBMC中TNIP1和TNFAIP3蛋白表達(dá)下降，提示C/EBPβ對(duì)TNIP1/TNFAIP3轉(zhuǎn)錄有增強(qiáng)作用。
　　3.SLE患者血漿能刺激單核巨噬細(xì)胞后C/EBPβ m