Asia-I型口蹄疫重組雞痘病毒疫苗株的構(gòu)建及小鼠免疫實驗研究.pdf

1、口蹄口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV）引起偶蹄動物感染的烈性傳染病之一，目前呈世界范圍流行趨勢，其有7種血清型，型間不能交叉保護，極易變異。疫苗接種仍是當(dāng)前預(yù)防口蹄疫的重要手段。而傳統(tǒng)疫苗有著諸多不安全因素。因此，如何設(shè)計、研制安全有效的新型口蹄疫疫苗是當(dāng)前亟待解決的重要科學(xué)問題。所以本研究構(gòu)建了針對 Asia-Ⅰ型 FMDV的重組雞痘病毒，并進行了小鼠免疫試驗研究，其內(nèi)容如下：

2、>　　利用本實驗室保存的Asia-Ⅰ型FMDV P1-2A和3C基因通過酶切、回收和連接等方法構(gòu)建了主要針對Asia-Ⅰ型FMDV的基因表達(dá)盒P1-2A-3C。再通過酶切、回收和連接等方法將表達(dá)盒 P1-2A-3C克隆至重組雞痘病毒中間轉(zhuǎn)移載體 pUTA2上，構(gòu)建成pUTA2-P1-2A-3C。再利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法通過BrdU加壓篩選出一株含有 FMDV表達(dá)盒 P1-2A-3C基因的重組雞痘病毒疫苗：vUTA2-P1-2A-3C，并通過R

3、T-PCR、IFA檢測方法對重組雞痘病毒鑒定。將鑒定正確的FMD重組雞痘病毒疫苗免疫 BALB/c小鼠，并檢測體液與細(xì)胞免疫指標(biāo)。研究結(jié)果表明，F(xiàn)MD重組雞痘病毒疫苗免疫組及滅活苗免疫組的小鼠均能產(chǎn)生特異性抗體（與對照組相比，P＜0.05）。首免14d后滅活苗免疫組FMDV抗體水平高于vUTA2-P1-2A-3C疫苗免疫組，但直至首免后21d差異不顯著。至首免后第28d時滅活苗免疫組FMDV抗體水平顯著高于vUTA2-P1-2A-3C免

4、疫組（P＜0.01）。流式細(xì)胞儀檢測所得數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果表明，與雞痘野毒對照組及PBS對照組比較，用滅活苗和重組雞痘病毒免疫組小鼠的T淋巴細(xì)胞亞類CD4+CD3+和CD8+CD3+的數(shù)量極顯著提高（P＜0.01）。重組疫苗免疫組CD4+CD3+、CD8+CD3+淋巴細(xì)胞亞類數(shù)量顯著高于滅活苗免疫組（P＜0.05）。而對照組之間差異不顯著。T淋巴細(xì)胞增殖試驗結(jié)果表明，用滅活苗和重組雞痘病毒疫苗免疫組小鼠 T淋巴細(xì)胞特異性增殖反顯著高于各