HSP90抑制劑干預(yù)TA2小鼠乳腺癌生長和轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 利用TA2小鼠高轉(zhuǎn)移乳腺癌移植瘤模型，觀察外源性HSP90抑制劑17-DMAG對其生長和轉(zhuǎn)移的影響，明確HSP90在TA2小鼠乳腺癌生長和轉(zhuǎn)移中的作用。通過檢測腫瘤組織中轉(zhuǎn)移相關(guān)分子MMP2、MMP7、MMP9、α-微管蛋白、整合素α4、αL、β2等的表達(dá)差異，初步探討17-DMAG抑制TA2小鼠乳腺癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)機(jī)制。 方法： 1.選取40只正常成年雌性TA2小鼠，自小鼠左側(cè)鼠鼷部接種TA2小鼠高轉(zhuǎn)移性乳

2、腺癌細(xì)胞懸液(1×105/ml)，0.2ml/只，并隨機(jī)分為給藥組和對照組，20只/組。接種后每日觀察小鼠活動狀態(tài)及成瘤情況，待觸及腫物后腹腔給予17-DMAG，1mg/只/次，一周兩次，同時(shí)測量腫瘤大小，繪制生長曲線。 2.分別在給藥后第14天(給藥4次后)和第21天(給藥6次后)將給藥組和對照組各處死10只小鼠，完整剝離小鼠移植瘤組織和肝、脾組織，稱重，留取部分新鮮腫瘤組織，TRIzol法提取組織·RNA，紫外分光法進(jìn)行RN

3、A定量，進(jìn)行Real-timePCR。剩余組織常規(guī)石蠟包埋，HE染色和免疫組化染色。分別從蛋白和mRNA水平檢測給藥組和對照組腫瘤組織中MMP2、MMP7、MMP9、α-微管蛋白、整合素α4、αL、β2mRNA的表達(dá)。 結(jié)果： 1.給藥組和對照組移植瘤生長情況接種瘤細(xì)胞懸液4天后于小鼠鼠蹊部皮下可觸及腫塊，隨著給藥次數(shù)的增加和移植瘤生長時(shí)間的延長，小鼠逐漸出現(xiàn)活動能力和體表溫度降低等狀態(tài)改變，尤其是對照組小鼠。部分小鼠在

4、實(shí)驗(yàn)過程中因腫物生長速度較快、轉(zhuǎn)移較重或給藥過程中不慎刺破小鼠腹腔臟器而死亡，所以最后(給藥21天)收集到的標(biāo)本為給藥組16例，對照組13例。 2.給予17-DMAG后，給藥組小鼠移植瘤生長較對照組明顯緩慢，尤其是給藥前期。給藥后第14天給藥組小鼠移植瘤的平均體積明顯低于對照組，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，給藥后第21天，兩組小鼠移植瘤平均體積間的差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.給藥組小鼠肝、脾轉(zhuǎn)移率分別為31.25

5、％，81.25％，對照組小鼠肝、脾轉(zhuǎn)移率均為92.31％，給藥組小鼠肝轉(zhuǎn)移率明顯低于對照組，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；而脾臟轉(zhuǎn)移率之間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。雖然給藥組小鼠脾轉(zhuǎn)移率未降低，但是鏡下可見脾臟結(jié)構(gòu)大致輪廓正常，轉(zhuǎn)移面積較對照組明顯小，僅在淋巴細(xì)胞之間可見散在的單個瘤巨細(xì)胞。 4.給藥后第14天給藥組小鼠移植瘤、肝和脾的重量均低于對照組小鼠，其中瘤重和脾重間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而肝重之間的差異

6、沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。給藥后第21天給藥組小鼠移植瘤、肝和脾的重量均低于對照組小鼠，尤其是脾重間的差異明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 5.免疫組化結(jié)果顯示，給藥組腫瘤組織中MMP2、MMP7、MMP9、α-微管蛋白、整合素αL、β2的表達(dá)(分別為：0.2133±0.1181，0.0305±0.0273，0.0833±0.0606，0.145±0.055，0.199±0.033，0.272±0.042)均低于對照組(分別為：

7、0.4621±0.2338，0.2193±0.1430，0.2300±0.0510，0.450±0，109，0.307±0.027，0.389±0.099)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而整合素α4的表達(dá)(0.13±0.052)稍高于對照組(0.12±0.040)，但差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 6.Real-timePCR的結(jié)果顯示給藥組MMP2、MMP9、整合素αL、β2mRNA的表達(dá)(分別為：0.0013±0.0004

8、，1.034±0.784，0.0020±0.0011，0.0094±0.0037)均低于對照組(0.0010±0.0003，2.318±1.294，0.0037±0.0023，0.0183±0.0072)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而MMP7、整合素α4mRNA的表達(dá)差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1.17-DMAG能夠明顯抑制TA2小鼠乳腺癌移植瘤早期的生長及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。 2.根據(jù)17-DMAG干預(yù)實(shí)

9、驗(yàn)結(jié)果，表明17-DMAG與HSP90結(jié)合后可以抑制HSP90的生物學(xué)功能，降低TA2小鼠乳腺癌肝脾轉(zhuǎn)移率，推測TA2小鼠乳腺癌的高轉(zhuǎn)移特性可能與其高表達(dá)HSP90有關(guān)。 3.17-DMAG給藥組MMP2、MMP9、MMP7、α-tubulin、整合素αL、β2表達(dá)下調(diào)，因而推測其機(jī)制可能是17-DMAG與HSP90結(jié)合后，影響了腫瘤轉(zhuǎn)移過程中相關(guān)分子(如MMP2、MMP9、MMP7、α-tubulin、整合素αL、β2)的表達(dá)