HSP90抑制劑Geldanamycin改善卵巢癌耐藥細胞對Taxol敏感性研究.pdf

1、熱休克蛋白90(HSP90)在生物進化過程中高度保守，作為經(jīng)典的分子伴侶，對許多參與細胞內(nèi)正常生理活動信號蛋白的結(jié)構(gòu)和功能都有調(diào)控作用。大多數(shù)腫瘤細胞內(nèi)HSP90蛋白表達水平升高，因此，抑制HSP90的功能，使其不能與客戶蛋白正常結(jié)合從而降解其底物，阻斷細胞信號傳導(dǎo)，可以抑制腫瘤細胞的生長。紫杉醇類藥物是卵巢癌臨床化療的一線藥物，化療耐藥嚴重影響卵巢癌病人預(yù)后。
　　目的:
　　本研究旨在探索HSP90抑制劑Geldanam

2、ycin(GA)單獨使用時以及與Taxol聯(lián)用時對卵巢癌細胞增殖和凋亡的影響，通過進一步探索兩藥聯(lián)用在卵巢癌耐Taxol細胞株中的協(xié)同作用機制，為改善卵巢癌紫杉醇化療耐藥提供科學依據(jù)。
　　方法:
　　1、CCK8實驗、平板克隆形成實驗檢測單獨使用GA以及與Taxol聯(lián)用對腫瘤細胞增殖的影響。2、流式細胞術(shù)檢測單獨使用GA以及與Taxol聯(lián)用對細胞周期和凋亡的影響。3、Western blotting方法探索GA與Taxol

3、聯(lián)用效應(yīng)的相關(guān)分子機制。
　　結(jié)果:
　　1、隨著Taxol濃度的增加，卵巢癌細胞A2780和A2780/T細胞的增殖抑制效應(yīng)不斷增強。當藥物濃度增加到200 nM及以上時，Taxol在兩株細胞中引起的增殖抑制效應(yīng)不再隨著濃度增加而增強。當Taxol濃度為10nM和20nM時，與A2780/T細胞相比，A2780細胞增殖抑制作用更明顯。2、隨著GA濃度的增加，卵巢癌細胞A2780和A2780/T細胞的增殖抑制效應(yīng)逐漸增強，且

4、A2780/T較A2780更敏感。當GA濃度為10nM時，兩株細胞的增殖抑制效應(yīng)尚不明顯，當藥物濃度為100nM時，兩株細胞的增殖抑制效應(yīng)均明顯增強。當藥物濃度增加到500 nM及以上時，GA在兩株細胞中引起的增殖抑制效應(yīng)不再隨著濃度增加而增強。3、100nM GA與Taxol聯(lián)用時，在細胞內(nèi)引起凋亡效應(yīng)較單獨使用GA或者Taxol增強，在一定濃度范圍內(nèi)，隨著Taxol濃度的增加，聯(lián)用后產(chǎn)生的細胞毒性作用呈協(xié)同增強效應(yīng)，經(jīng)統(tǒng)計學分析，聯(lián)

5、用組和單獨使用GA或者Taxol組之間有顯著性差異。4、Western blot結(jié)果顯示，GA與Taxol聯(lián)用時，A2780/T細胞內(nèi)剪切型PARP及Caspase3表達顯著性增強，H3P、pho-P38和pho-H2AX表達明顯增加，而pho-CDK1(pho-Y15)表達明顯下降。
　　結(jié)論:
　　HSP90小分子抑制劑GA可以有效抑制卵巢癌細胞的增殖，低劑量GA(100 nM)可顯著增強紫杉醇在卵巢癌耐藥細胞株A278