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文檔簡介
1、近年來我國癌癥的發(fā)病率和死亡率逐年攀升,嚴(yán)重威脅著人類健康及生命。據(jù)統(tǒng)計僅2015年中國新增癌癥患者人數(shù)約為429.2萬,死亡人數(shù)約為281.4萬。目前臨床上多采用手術(shù)和放化療法治療癌癥,但因上述療法缺乏對腫瘤細胞的特異性,導(dǎo)致治療過程中正常細胞也嚴(yán)重受損,因此急需探索腫瘤治療的新方法?;蛑委熓且环N惡性腫瘤的生物療法,但關(guān)鍵問題是如何安全高效地將治療基因遞送至人體內(nèi)。目前腫瘤基因治療中腺病毒載體應(yīng)用最廣泛,溶瘤腺病毒的優(yōu)勢是僅殺傷腫瘤
2、細胞但不傷害正常細胞,因此可作為一種抗腫瘤基因藥物加以應(yīng)用。凋亡素(Apoptin)是雞貧血病毒VP3基因編碼的一種功能蛋白,僅在腫瘤細胞內(nèi)復(fù)制;血凝素-神經(jīng)氨酸酶(HN)是新城疫病毒的一種表面蛋白,能激活細胞凋亡途徑。因此本研究構(gòu)建表達Apoptin和HN的重組腺病毒Ad-VT(Ad-Apoptin-hTERTp-E1a)和Ad-HP(Ad-HN-PEG3p-E1a),研究其是否能成為有效的抗腫瘤基因藥物。
本研究分別用Ad
3、-VT感染人骨肉瘤和正常細胞,以及用Ad-HN-PEG3p-E1a感染人胃癌細胞。通過MTT法檢測重組腺病毒對腫瘤細胞和正常細胞的增殖抑制率。體外實驗中,在熒光顯微鏡下觀察腫瘤細胞和正常細胞經(jīng)AO/EB染色、DAPI染色后的形態(tài)學(xué)變化;再利用Annexin V/PI方法通過流式細胞術(shù)和染色分析重組腺病毒對腫瘤細胞的抑制作用方式,并通過Caspase酶活性檢測以上重組腺病毒對腫瘤細胞的抑制作用途徑。體內(nèi)實驗中,采取構(gòu)建動物模型并考察腫瘤生
4、長趨勢和平均生存期。
Ad-VT和Ad-HN-PEG3p-E1a能抑制兩種腫瘤細胞增殖,并伴隨一定的時間效應(yīng)和劑量效應(yīng)關(guān)系,但對正常細胞無影響。體外實驗中驗證了以上兩種重組腺病毒能誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡,且是通過激活Caspase相關(guān)酶方式實現(xiàn)的。體內(nèi)實驗中,Ad-VT和Ad-HN-PEG3p-E1a能有效減緩瘤體生長并能延長平均生存期。
結(jié)果表明,Ad-VT(Ad-Apoptin-hTERTp-E1a)和Ad-HP(Ad
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