青海同德藏族人群感染乙肝病毒基因型及變異的初步研究.pdf

1、目的：了解青海省同德縣藏族自然人群感染乙肝病毒（HBV）基因型、血清亞型分布特征，并初步分析基因型與臨床類型之間的關(guān)系；了解青海省同德縣藏族自然人群感染HBV核心基因啟動子（BCP）T1762/A1764雙突變、前核（PreC）A1896突變的分布狀況并初步分析其與基因型、HBeAg狀態(tài)、臨床類型之間的關(guān)系。
　　 方法：選取2006年經(jīng)青海同德藏族人群乙肝患病率調(diào)查發(fā)現(xiàn)的表面抗原（HbsAg）陽性的311份血清，通過提取核酸和

2、巢式PCR擴(kuò)增，獲得HBV S和C基因片段并直接測序。使用DNASTAR軟件，將樣本HBV S基因和C基因測序結(jié)果與GeneBank中的HBV參考株比對并進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)生樹分析，確定其基因型；依據(jù)樣本S基因序列推導(dǎo)出其氨基酸序列，根據(jù)HBV包膜蛋白S上的共同抗原決定簇α與第122、127，160位氨基酸確定其血清亞型；以參考序列AB033556為標(biāo)準(zhǔn)，將樣本C基因測序結(jié)果與之相比，確定是否發(fā)生BCPT1762/A1764雙突變、PreC A

3、1896突變。最后，使用SAS8.0軟件對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析，率的比較采用x錯誤!未指定書簽。2檢驗及Fisher確切概率法。
　　 結(jié)果：
　　 1、311例來源于自然人群的HBsAg陽性血清中，S基因擴(kuò)增陽性304例，擴(kuò)增陽性率為97.8％；擴(kuò)增產(chǎn)物測序成功298例，測序成功率為98.0％。C基因擴(kuò)增陽性296例，擴(kuò)增陽性率為95.2％； C基因擴(kuò)增產(chǎn)物測序成功283例，測序成功率95.6％。S、C基因均擴(kuò)增陽性并測序

4、成功的271例，占311例HBsAg陽性血清的87.1％。
　　 2、271例基因型可確定樣本中，C/D重組型261例，占96.3％，C型基因10例，占3.7％；血清ayw2亞型259例，占95.6％，adr亞型10例，占3.7％，adw2亞型2例，占0.7％。C/D重組基因型中，男性128例，女性133例；C基因型中，男性4例，女性6例，不同基因型的性別構(gòu)成沒有差異（P=0.5745）。<15歲組、15～組、30～組、50～組

5、中C/D重組基因型分別有54、95、90、22例，C基因型分別有4、4、1、1例，不同基因型年齡別構(gòu)成亦無顯著差異（錯誤！未指定書簽。P=0.3261）。
　　 3、271例基因型可確定樣本中，免疫耐受期慢性乙肝126例，其中C/D重組基因型119例，C基因型7例； HBeAg陽性的慢性乙肝32例，其中C/D重組基因型32例，C基因型0例；非活動性慢性乙肝90例，其中C/D重組基因型88例，C基因型2例；HBeAg陰性的慢性乙肝

6、23例，其中C/D重組基因型22例，C基因型1例；不同基因型的臨床類型構(gòu)成沒有差異（P=0.3862）。
　　 4、271例基因型可確定樣本中，發(fā)生BCP T1762/A1764雙突變的有56例，突變率為20.7％；其中，男性、女性分別為25、31，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.4944）；各年齡組人數(shù)分別為8、14、23、11，突變率隨年齡增加而增高（P<0.005）；C基因型與C/D重組型中分別為0、56，C/D重組型突變率高于

7、C基因型（P=0.0294）；HBeAg陽性者與HBeAg陰性者中分別為20、36，HBeAg陰性者突變率高于HBeAg陽性者（P<0.0001）；免疫耐受期慢性乙肝、非活動性慢性乙肝、HBeAg陽性慢性乙肝、HBeAg陰性慢性乙肝者中分別為12、29、8、7，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.0003），HBeAg陽性的慢性乙肝者BCP T1762/A1764雙突變發(fā)生率高于免疫耐受期的慢性乙肝者（P<0.0001）。
　　 5、27

8、1例基因型可確定樣本中，發(fā)生PreC A1896突變的有27例，占10.0％；男性、女性中分別為10、17，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.201）；各年齡組分別為5、10、8、4，差異沒有統(tǒng)計意義（P>0.25）；C基因型與C/D重組型中分別為0、27，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.6053）；HBeAg陽性者與HBeAg陰性者中分別為5、22，HBeAg陰性者突變率高于HBeAg陽性者（P<0.0001）；免疫耐受期慢性乙肝、非活動性慢性乙肝

9、、HBeAg陽性慢性乙肝、HBeAg陰性慢性乙肝中分別為4、21、0、2，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.0001），其中非活動性慢性乙肝突變發(fā)生率高于免疫耐受期慢性乙肝（P<0.0001）。
　　 結(jié)論：青海省同德縣藏族人群感染HBV基因型以C/D重組型為主，血清型以ayw2為主；青海同德藏族人群感染HBV BCP T1762/A1764雙突變與PreC A1896突變流行程度相對較低；這兩種突變與HBeAg陰性有關(guān)，BCP T17