干擾RhoA表達修復脊髓損傷的實驗研究.pdf

1、目的：檢測大鼠脊髓損傷后不同時間RhoA的表達，探討其與神經軸突再生、脊髓功能之間的相關性，并通過C3干擾RhoA的表達，探討其治療脊髓損傷的療效，為修復脊髓損傷提供新策略。 方法：1.在基因表達和蛋白質翻譯雙重水平上，觀察脊髓損傷后不同時間RhoA的表達情況Wistar大鼠80只，隨機分為對照組(40只)，實驗組(40只)以IMPACTOR-II法建立T10急性脊髓損傷模型，分別于造模成功后8小時、24小時、3天、7天和2周對

2、照組和實驗組各取4只實驗動物，提取損傷段脊髓的總RNA，實時定量PCR和凝膠電泳檢測RhoAmRNA的表達：兩組另取4只動物于上述時間段，行損傷段脊髓冰凍組織切片，免疫組化染色觀察RhoA蛋白表達情況。2.通過C3干擾RhoA表達，觀察對大鼠脊髓功能恢復情況的影響Wistar大鼠36只以IMPACTOR-II法建立T10急性脊髓損傷模型，造模成功后隨機分為3組，每組12只，分別為：對照組、脊髓損傷局部多點注射C3組(1.75mg/kg，

3、分3個點注射)和尾靜脈注射C3組(250μg/kg/天，造模后連用7天)。造模7天后每組各取4只動物進行實時定量PCR檢測和組織切片免疫組化染色，測定RhoA活性；每周對各組實驗動物脊髓損傷后運動功能的恢復情況進行行為學評分(BBB評分法)；12周后進行BDA(biotinylateddextranamine，生物素化葡聚糖胺)神經順行示蹤標記，標記2周后取出實驗動物損傷段脊髓，行5μm快速冰凍切片，并進行進行熒光染色及HE染色。

4、 結果：脊髓損傷后8小時RhoAmRNA表達開始增高，傷后3天達高峰，7天后開始降低，2周時表達顯著降低，與對照組無顯著性差異；免疫組化染色顯示：RhoA蛋白于脊髓損傷后3天染色明顯增強，并持續(xù)高表達2周。脊髓損傷后7天實時定量PCR及組織切片免疫組化結果顯示：兩實驗組(脊髓損傷局部多點注射C3組和尾靜脈注射C3組)RhoA表達較對照組降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，而兩實驗組之間無顯著性差異；BBB評分4周以后組間比較，差

5、異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，其中尾靜脈注射C3組明顯高于對照組(P<0.05)：12周后HE染色，光學顯微鏡觀察顯示，應用C3組，有部分神經纖維通過損傷部位，而對照組幾乎未見再生神經纖維穿越，兩組都可見脊髓空洞及膠質瘢痕形成；12周BDA神經示蹤顯示實驗組軸突再生延伸明顯增加，皮質脊髓束再生延伸，部分可以通過損傷區(qū)到達遠端。 結論：大鼠脊髓損傷后RhoAmRNA表達明顯增高，且具有明顯時間曲線，RhoA蛋白表達增高較mRNA