云南三地區(qū)帶絳蟲(chóng)分子鑒定研究.pdf

1、目的:1.運(yùn)用DNA序列分析方法對(duì)采自云南楚雄、怒江和大理地區(qū)的帶絳蟲(chóng)標(biāo)本的線粒體DNA—細(xì)胞色素B序列部分片段進(jìn)行多態(tài)性聚類(lèi)研究。2.鑒定三地區(qū)帶絳蟲(chóng)標(biāo)本蟲(chóng)種類(lèi)型。3.探索一種直接提取帶絳蟲(chóng)線粒體DNA基因組的方法。 方法:取楚雄、怒江、大理和從江帶絳蟲(chóng)標(biāo)本成蟲(chóng)節(jié)片，采用改良?jí)A變性法提取帶絳蟲(chóng)mtDNA基因組。PCR擴(kuò)增mtDNA—Cytb序列部分片段，并測(cè)序。結(jié)合美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心中已知亞洲帶絳蟲(chóng)、牛帶絳蟲(chóng)和豬帶絳蟲(chóng)m

2、tDNA—Cytb序列，計(jì)算各序列間的遺傳距離、進(jìn)行同源性分析并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。 結(jié)果:提取出的mtDNA A260/280值在1．8左右，濃度在378ng/μl—1，113ng/μl之間。楚雄、怒江、大理和從江帶絳蟲(chóng)標(biāo)本mtDNA—Cytb序列部分片段A+T的平均含量（67．96%）高于G+C的平均含量（32．04%）。5株帶絳蟲(chóng)標(biāo)本和亞洲帶絳蟲(chóng)、牛帶絳蟲(chóng)、豬帶絳蟲(chóng)同源序列中變異位點(diǎn)有28個(gè)，其中單堿基變異位點(diǎn)23個(gè)，簡(jiǎn)約信息

3、位點(diǎn)數(shù)為5個(gè)；轉(zhuǎn)換/顛換比為4．67。楚雄帶絳蟲(chóng)標(biāo)本距牛帶絳蟲(chóng)的遺傳距離為0．01；怒江（1、2）和大理帶絳蟲(chóng)標(biāo)本距亞洲帶絳蟲(chóng)的遺傳距離均為0．00。怒江（1、2）和大理帶絳蟲(chóng)標(biāo)本與亞洲帶絳蟲(chóng)的同源性為100%、100%、100%；楚雄帶絳蟲(chóng)標(biāo)本與從江牛帶絳蟲(chóng)標(biāo)本和牛帶絳蟲(chóng)的同源性為99%、99%。系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)顯示：怒江（1、2）、大理帶絳蟲(chóng)標(biāo)本和亞洲帶絳蟲(chóng)聚為一枝，楚雄、從江帶絳蟲(chóng)標(biāo)本和牛帶絳蟲(chóng)聚為一枝；這兩支匯合后再與豬帶絳蟲(chóng)聚合。