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文檔簡介
1、目的:通過研究基因轉(zhuǎn)染的SPATA5L1對KB細(xì)胞增殖和遷移能力的影響以及對Wnt/β-catenin信號通路的作用，探索腫瘤放化療后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。
方法:構(gòu)建一攜帶全部SPATA5L1 cDNA序列的重組質(zhì)粒(pEX-1-SPATA5L1)并轉(zhuǎn)染到KB細(xì)胞，得到穩(wěn)定表達(dá)的轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。不攜帶基因的空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞株和非轉(zhuǎn)染KB細(xì)胞作為對照細(xì)胞。顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的形態(tài)學(xué)變化，CCK-8比色法檢測了轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的增殖能
2、力，Transwell遷移實(shí)驗(yàn)觀察轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的遷移能力，分別用熒光定量PCR和蛋白印跡技術(shù)檢測了轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)與Wnt信號通路有關(guān)的基因E2F1、β-catenin和c-myc的mRNA表達(dá)水平和蛋白含量變化。
結(jié)果:成功獲得穩(wěn)定高表達(dá)SPATA5L1的轉(zhuǎn)染細(xì)胞株pEX-1-SPATA5L1-KB細(xì)胞。與兩種對照細(xì)胞相比較，轉(zhuǎn)染細(xì)胞的形態(tài)明顯梭形、纖維細(xì)胞樣改變，細(xì)胞增殖和遷移能力明顯增強(qiáng)(p＜0.01)，β-catenin和
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