電離輻射和紫杉醇誘導(dǎo)的多核細(xì)胞形成中SPATA5L1、Cyclin B2表達(dá)的變化.pdf

1、背景及目的:電離輻射與紫杉醇協(xié)同作用,可以誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的人口腔上皮癌KB細(xì)胞產(chǎn)生G2／M期阻滯,形成多核細(xì)胞,并最終造成死亡。先前通過基因芯片篩選研究發(fā)現(xiàn)在經(jīng)過電離輻射和／或紫杉醇作用后,有10條與細(xì)胞分裂有關(guān)的基因存在差異表達(dá)。本研究旨在通過Real-time PCR和Western Blot定量分析其中兩條基因 SPATA5L1、Cyclin B2的表達(dá)變化來揭示G2／M期阻滯及多核細(xì)胞形成的分子機(jī)制。
　　 方法:不同劑量

2、60Coγ射線照射聯(lián)合不同濃度紫杉醇作用于KB細(xì)胞,用以下實(shí)驗(yàn)觀察受照細(xì)胞的變化:(1)倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化,細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制效應(yīng)；(2)利用Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)SPATA5L1基因表達(dá)隨照射劑量和藥物濃度變化的情況:(3)Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)電離輻射聯(lián)合紫杉醇對(duì)KB細(xì)胞內(nèi) SPATA5L1、Cyclin B2蛋白含量的影響。
　　 結(jié)果:(1)電離輻射和紫杉醇協(xié)同作用能顯著抑

3、制KB細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖,且這種協(xié)同效應(yīng)是照射劑量和藥物濃度依賴性的；(2)KB細(xì)胞經(jīng)電離輻射、紫杉醇或兩者聯(lián)合作用后,形成大量多核細(xì)胞,并最終死亡；(3)Real-time PCR結(jié)果表明,KB細(xì)胞受到不同劑量照射、40nmol／L紫杉醇和兩者聯(lián)合作用后SPATA5L1的表達(dá)明顯上調(diào)；(4)Western Blot檢測(cè)結(jié)果表明,KB細(xì)胞在受到6Gy以下不同劑量的電離輻射或電離輻射與40 nmol／L紫杉醇協(xié)同作用后,SPATA5L1的表達(dá)

4、量明顯增加,但同時(shí)Cyclin B2的表達(dá)量則下降。
　　 結(jié)論:多核細(xì)胞形成是電離輻射與紫杉醇協(xié)同作用誘導(dǎo)KB細(xì)胞生長(zhǎng)增殖抑制的主要原因之一?？赡艿姆肿訖C(jī)制是細(xì)胞有絲分裂相關(guān)蛋白 SPATA5L1上調(diào)表達(dá)和Cyclin B2適度的下調(diào)表達(dá)。Cyclin B2的下調(diào)表達(dá)導(dǎo)致有絲分裂紡錘體形成抑制,而 SPATA5L1上調(diào)表達(dá)可能干擾細(xì)胞收縮環(huán)的功能。最終結(jié)果是在細(xì)胞分裂的過程中,細(xì)胞核分裂后細(xì)胞質(zhì)的分裂被阻止,形成多核細(xì)胞,并最