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文檔簡介
1、目的:隨著社會經(jīng)濟的穩(wěn)步發(fā)展人民生活條件在近年來也不斷得到改善,但是隨之而來的高血壓、糖尿病、冠心病等代謝性疾病的發(fā)生率、死亡率卻逐年攀升,其伴發(fā)的腦卒中、心力衰竭、心肌梗塞、腎功能損害以及外周、心臟和中樞動脈血管病變嚴重威脅人類健康。在血管的解剖結(jié)構(gòu)中內(nèi)皮細胞構(gòu)成血管內(nèi)壁的屏障,其形態(tài)、功能對血管疾病有著非常重要的影響,且內(nèi)皮細胞的損傷已成為血管疾病的啟動因素。所以,對內(nèi)皮細胞功能極其影響機制的研究在心血管病等代謝性疾病的防治方面體現(xiàn)
2、出極其深遠社會意義。瞬時受體電位通道-香草酸亞型1(Transient ReceptorPotential Vanilloid1,TRPV1)可以被我們常用的食品紅辣椒中的辣椒素(Capsaicin)激活,既往大量的研究表明,TRPV1廣泛分布于神經(jīng)系統(tǒng)中,其也分布在內(nèi)皮細胞中,TRPV1激活后可引起鈣離子向細胞內(nèi)流,使細胞內(nèi)鈣離子(Intracellular Calcium,[Ca2+]i)濃度升高,長期激活TRPV1可以使內(nèi)皮細胞舒
3、張,從而改善內(nèi)皮細胞和血管功能;TRPV1與蛋白激酶A(Protein Kinase A, PKA)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(Endothelial Nitric-oxideSynthase,eNOS)信號通路相關(guān),且PKA細胞信號傳導(dǎo)通路與細胞增殖通路密切聯(lián)系;而磷脂酰肌醇-3激酶(Phosphatidylinositol3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B信號通路,即PI3K/AKT信號通路是經(jīng)典的增殖相關(guān)細胞信號傳遞通路。綜上,我
4、們推測,TRPV1可調(diào)控PI3K/AKT/eNOS通路信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白的表達,促進內(nèi)皮細胞增殖、遷移,改善內(nèi)皮細胞功能、預(yù)防血管疾病。
材料和方法:
實驗材料:整個研究由細胞實驗構(gòu)成。細胞實驗以培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cell,HUVEC)為研究對象。
實驗分組:分為對照組(Control)、辣椒素組(Capsaicin)、辣椒卓平組(Capsaz
5、epine)、辣椒卓平+辣椒素組(Capsazepine+Capsaicin)、LY294002組(LY294002)、LY294002+辣椒素組(LY294002+Capsaicin)、L-NAME組(L-NAME)、L-NAME+辣椒素組(L-NAME+Capsacin)。
1、用免疫熒光染色法觀察TRPV1在人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)的表達;
2、應(yīng)用Transewell實驗檢測各組干預(yù)條件干預(yù)后人臍靜脈內(nèi)
6、皮細胞(HUVEC)的遷移能力;
3、用CCK8試劑盒檢測各組干預(yù)條件干預(yù)后人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)的增殖能力;
4、用蛋白免疫印跡法檢測各組干預(yù)條件干預(yù)后人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)增殖相關(guān)信號通路蛋白(AKT、p-AKT、eNOS、p-eNOS)的表達。
結(jié)果:
1、TRPV1在人靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)中有表達。
2、辣椒素(Capsaicin)激活TRPV1后人靜脈內(nèi)皮
7、細胞(HUVEC)遷移能力增加;辣椒卓平(Capsazepine)、L-NAME和LY294002干預(yù)處理后人靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)遷移能力下降。
3、辣椒素(Capsaicin)激活TRPV1后人靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)增殖能力增加;辣椒卓平(Capsazepine)、L-NAME和LY294002干預(yù)處理后人靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)增殖能力下降。
4、辣椒素(Capsaicin)刺激可明顯上調(diào)人靜脈內(nèi)皮細
8、胞(HUVEC)phospho-AKT、phospho-eNOS蛋白的表達;用PI3K/AKT通道受體拮抗劑LY294002干預(yù)HUVEC,或者用eNOS抑制劑L-NAME干預(yù)后;人靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)phospho-AKT、phospho-eNOS蛋白的表達明顯降低;用PI3K/AKT通道受體拮抗劑LY294002干預(yù)HUVEC,或者用eNOS抑制劑L-NAME干預(yù)后再用辣椒素(Capsaicin)刺激HUVEC,phospho
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