抑制Paip1表達對肝癌細胞遷移、增殖影響的研究.pdf

1、目的：
　　前期我們實驗小組使用芯片技術(shù)篩選，通過對肝癌和癌旁肝組織檢測發(fā)現(xiàn)了肝癌中Paip1蛋白表達量是上調(diào)的。本研究擬通過應用慢病毒載體介導的RNA干擾技術(shù)，使肝癌細胞中Paip1基因的蛋白表達量下調(diào)，觀察沉默Paip1基因?qū)Ω伟┘毎w移、增殖能力影響，進而探索Paip1基因在肝癌的發(fā)生發(fā)展中所起的作用。
　　研究方法：
　　1.通過Western Blot方法在蛋白水平檢測Paip1在四種不同人肝癌細胞株HepG

2、2,HepG2.2.15,SMMC-7721,Hep3B中和人肝細胞株L02細胞中的表達差異；
　　2.在肝癌Hep G2細胞和SMMC-7721細胞中采用慢病毒介導的RNA干擾技術(shù)沉默Paip1基因表達，用倒置熒光顯微鏡下觀察感染效率，通過Western blot方法檢驗沉默效果。并且通過使用嘌呤霉素篩選出慢病毒感染的穩(wěn)定細胞（ SMMC-7721-LV-sh-Paip1和 HepG2-LV-sh-Paip1,SMMC-7721

3、-sh-eGFP和HepG2-sh-eGFP），通過細胞劃痕愈合實驗、CCK-8實驗觀察Paip1基因沉默后細胞遷移和細胞增殖能力的變化；采用Western blot方法檢測Paip1基因沉默后PDCD4蛋白水平變化。
　　研究結(jié)果：
　　1.Paip1蛋白表達水平在人肝癌細胞株HepG2,HepG2.2.15,SMMC-7721,Hep3B中較人肝細胞株L02明顯高（P<0.05），我們從中選出兩株肝癌細胞株（HepG2和

4、SMMC-7721）完成接下來的細胞實驗。
　　2.采用慢病毒介導RNAi干擾人肝癌細胞株HepG2和SMMC-7721細胞后，用熒光顯微鏡下觀察GFP表達情況，約90％細胞發(fā)出綠色熒光，感染效率高；Western Blot檢測結(jié)果顯示HepG2和SMMC-7721細胞實驗組均能能有效的下調(diào)Paip1蛋白水平。
　　3.劃痕24小時后，感染LV-sh-Paip1慢病毒（目的組）的肝癌HepG2細胞的遷移面積變化較陰性對照組小

5、（P<0.01）；劃痕24小時后，感染LV-sh-Paip1慢病毒（目的組）的肝癌SMMC-7721細胞遷移面積變化較陰性對照組減小（P<0.01）。
　　4.感染LV-sh-Paip1慢病毒組（目的組）肝癌HepG2細胞的增殖能力較相應的陰性對照組及空白對照組亦下降（抑制率為48.60%）；感染LV-sh-Paip1慢病毒組（目的組）肝癌SMMC-7721細胞的增殖能力較相應的陰性對照組及空白對照組下降（抑制率為52.32%）。

6、
　　5.Western Blot檢測感染LV-sh-Paip1慢病毒組（目的組）肝癌SMMC-7721細胞的PDCD4蛋白相對表達量，與陰性對照組及空白對照組相比有明顯升高（P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.Paip1蛋白表達水平在人肝癌細胞株HepG2,HepG2.2.15,SMMC-7721,Hep3B中較人肝細胞株L02明顯高，說明Paip1可能在肝癌中高表達。
　　2.利用RNAi干擾Paip1基因