抑制Paip1表達(dá)對肝癌細(xì)胞遷移、增殖影響的研究.pdf

1、目的：
　　前期我們實(shí)驗(yàn)小組使用芯片技術(shù)篩選，通過對肝癌和癌旁肝組織檢測發(fā)現(xiàn)了肝癌中Paip1蛋白表達(dá)量是上調(diào)的。本研究擬通過應(yīng)用慢病毒載體介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)，使肝癌細(xì)胞中Paip1基因的蛋白表達(dá)量下調(diào)，觀察沉默Paip1基因?qū)Ω伟┘?xì)胞遷移、增殖能力影響，進(jìn)而探索Paip1基因在肝癌的發(fā)生發(fā)展中所起的作用。
　　研究方法：
　　1.通過Western Blot方法在蛋白水平檢測Paip1在四種不同人肝癌細(xì)胞株HepG

2、2,HepG2.2.15,SMMC-7721,Hep3B中和人肝細(xì)胞株L02細(xì)胞中的表達(dá)差異；
　　2.在肝癌Hep G2細(xì)胞和SMMC-7721細(xì)胞中采用慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)沉默Paip1基因表達(dá)，用倒置熒光顯微鏡下觀察感染效率，通過Western blot方法檢驗(yàn)沉默效果。并且通過使用嘌呤霉素篩選出慢病毒感染的穩(wěn)定細(xì)胞（ SMMC-7721-LV-sh-Paip1和 HepG2-LV-sh-Paip1,SMMC-7721

3、-sh-eGFP和HepG2-sh-eGFP），通過細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)、CCK-8實(shí)驗(yàn)觀察Paip1基因沉默后細(xì)胞遷移和細(xì)胞增殖能力的變化；采用Western blot方法檢測Paip1基因沉默后PDCD4蛋白水平變化。
　　研究結(jié)果：
　　1.Paip1蛋白表達(dá)水平在人肝癌細(xì)胞株HepG2,HepG2.2.15,SMMC-7721,Hep3B中較人肝細(xì)胞株L02明顯高（P<0.05），我們從中選出兩株肝癌細(xì)胞株（HepG2和

4、SMMC-7721）完成接下來的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。
　　2.采用慢病毒介導(dǎo)RNAi干擾人肝癌細(xì)胞株HepG2和SMMC-7721細(xì)胞后，用熒光顯微鏡下觀察GFP表達(dá)情況，約90％細(xì)胞發(fā)出綠色熒光，感染效率高；Western Blot檢測結(jié)果顯示HepG2和SMMC-7721細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組均能能有效的下調(diào)Paip1蛋白水平。
　　3.劃痕24小時(shí)后，感染LV-sh-Paip1慢病毒（目的組）的肝癌HepG2細(xì)胞的遷移面積變化較陰性對照組小

5、（P<0.01）；劃痕24小時(shí)后，感染LV-sh-Paip1慢病毒（目的組）的肝癌SMMC-7721細(xì)胞遷移面積變化較陰性對照組減?。≒<0.01）。
　　4.感染LV-sh-Paip1慢病毒組（目的組）肝癌HepG2細(xì)胞的增殖能力較相應(yīng)的陰性對照組及空白對照組亦下降（抑制率為48.60%）；感染LV-sh-Paip1慢病毒組（目的組）肝癌SMMC-7721細(xì)胞的增殖能力較相應(yīng)的陰性對照組及空白對照組下降（抑制率為52.32%）。

6、
　　5.Western Blot檢測感染LV-sh-Paip1慢病毒組（目的組）肝癌SMMC-7721細(xì)胞的PDCD4蛋白相對表達(dá)量，與陰性對照組及空白對照組相比有明顯升高（P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.Paip1蛋白表達(dá)水平在人肝癌細(xì)胞株HepG2,HepG2.2.15,SMMC-7721,Hep3B中較人肝細(xì)胞株L02明顯高，說明Paip1可能在肝癌中高表達(dá)。
　　2.利用RNAi干擾Paip1基因