天然小分子及N-糖基化對(duì)OATP2B1介導(dǎo)的攝取轉(zhuǎn)運(yùn)的影響.pdf

1、有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽（Orgainic antion transporting polypeptides，OATPs）是廣泛表達(dá)于人體組織器官細(xì)胞膜上的一類(lèi)攝取轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，能夠特異的轉(zhuǎn)運(yùn)多種兩親性有機(jī)陰離子化合物、中性化合物甚至某些陽(yáng)離子化合物進(jìn)入細(xì)胞，被普遍認(rèn)為是決定各種藥物、外源性化合物及毒素等吸收、分布、代謝及排泄的關(guān)鍵因素。OATP2B1是有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽家族中的主要成員之一，表達(dá)于人體肝臟、小腸、腦、心、腎、胎盤(pán)及血小板等部位并

2、能特異性的轉(zhuǎn)運(yùn)某些化合物包括內(nèi)源性化合物，如磺溴酞鈉、3-硫酸雌酮、硫酸脫氫表雄酮、牛磺膽酸鹽以及外源性藥物如非索非那定、格列本脲、他汀類(lèi)藥物等。由于OATP2B1在人體的廣泛表達(dá)并能介導(dǎo)多種藥物轉(zhuǎn)運(yùn)入細(xì)胞，因此具有非常重要的作用。
　　天然植物在臨床、飲食、養(yǎng)生等領(lǐng)域的使用與日俱增，加上天然植物的種類(lèi)及其化學(xué)成分復(fù)雜，使得日常生活中OATPs底物藥與天然植物化學(xué)成分合用的情況成為可能。若某些天然植物成分對(duì)OATPs產(chǎn)生影響，可能

3、會(huì)引發(fā)OATPs介導(dǎo)的藥物-藥物相互作用。為了避免不良藥物相互作用的發(fā)生，同時(shí)保證藥物療效及用藥安全性，指導(dǎo)臨床合理用藥，本文就多種天然小分子對(duì)OATP2B1功能的影響展開(kāi)了研究。通過(guò)LC-MS/MS檢測(cè)轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)細(xì)胞內(nèi)3-硫酸雌酮（E3S）的量，我們對(duì)不同植物來(lái)源的多種天然小分子對(duì)OATP2B1介導(dǎo)的E3S轉(zhuǎn)運(yùn)的影響進(jìn)行了細(xì)胞水平上的研究。結(jié)果顯示，燈盞乙素（S-7-G）、桑皮黃素、甘草次酸及菊花梗葉黃酮提取物對(duì) OATP2B1功能有明顯

4、的抑制作用，其IC50分別為2.0μM、1.6μM、13.3μM、2.25μg/mL，是本論文發(fā)現(xiàn)的OATP2B1抑制劑。同時(shí)，我們對(duì)槲皮素、甘草次酸及其糖苷化合物也進(jìn)行了濃度依賴(lài)的抑制研究。結(jié)果表明，槲皮素及甘草次酸的糖苷化產(chǎn)物對(duì)OATP2B1的抑制作用與其苷元相比均減弱，IC50是苷元的5倍以上。
　　N-糖基化作為一種常見(jiàn)且多樣化的蛋白翻譯后調(diào)控方式，對(duì)蛋白質(zhì)在組織和細(xì)胞中的定位、功能、活性、壽命和多樣性起著非常重要的作用。

5、然而，N-糖基化如何對(duì)OATP2B1功能及表達(dá)產(chǎn)生影響以及OATP2B1有哪些可能的糖基化位點(diǎn)并未見(jiàn)報(bào)道。本文第二部分探究了N-糖基化對(duì)OATP2B1功能及表達(dá)的影響。通過(guò)生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)到了四個(gè)可能的OATP2B1 N-糖基化位點(diǎn)，并將糖基化位點(diǎn)的天冬酰胺殘基突變成谷氨酰胺殘基構(gòu)建去糖基化突變的OATP2B1，分別為N146Q、N176Q、N350Q、N538Q，進(jìn)而在細(xì)胞水平對(duì)突變型和野生型OATP2B1進(jìn)行了E3S轉(zhuǎn)運(yùn)功能及表達(dá)

6、的比較和分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，突變體N146Q和N350Q對(duì)E3S的攝取大大增加，而蛋白表達(dá)量并未增加；N176Q突變體E3S攝取活性和蛋白表達(dá)變化均不大；突變體N538Q E3S攝取量減少了44%，蛋白表達(dá)量也明顯降低。
　　本課題的兩部分研究使我們對(duì)OATP2B1轉(zhuǎn)運(yùn)功能有了進(jìn)一步的了解。天然小分子中OATP2B1新的抑制劑的發(fā)現(xiàn)提示我們，當(dāng)服用OATP2B1底物藥時(shí)，應(yīng)注意避免與前述這些抑制劑同時(shí)服用，以避免不良藥物相互作用的