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1、目的:目前,缺氧對(duì)右心室心肌細(xì)胞凋亡的作用尚不明確,右心室心肌肥大與心肌細(xì)胞凋亡的關(guān)系以及右心室心肌細(xì)胞凋亡的發(fā)生發(fā)展和機(jī)制也不清楚。故通過(guò)建立慢性缺氧心肌肥大大鼠模型,研究抗凋亡基因bcl-2和促凋亡基因bad在右心室心肌細(xì)胞中表達(dá)的變化,探討慢性缺氧致大鼠心肌細(xì)胞凋亡的發(fā)生規(guī)律及其機(jī)制。 方法:1.建立慢性缺氧大鼠模型:大鼠置于正常氣壓下行慢性持續(xù)缺氧(氧濃度控制在9.5%~10.5%)。 2.實(shí)驗(yàn)分組和處理:采用析
2、因設(shè)計(jì)方法,將大鼠隨機(jī)分為慢性缺氧組和正常對(duì)照組,并于實(shí)驗(yàn)的第14天,第21天和第28天分批將各組大鼠處死。 3.檢測(cè)RV/(LV+S),RV/BW比值,用Hoechst33258雙染色法進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,用原位末端標(biāo)記(TUNEL)法進(jìn)行心肌細(xì)胞凋亡形態(tài)及計(jì)量分析,用RT-PCR檢測(cè)β-MHC,bcl-2,bad等mRNA的表達(dá)水平,用WesternBlotting檢測(cè)β-MHC,bcl-2,bad等蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)
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