面神經(jīng)損傷修復機制研究.pdf

1、第一部分 面神經(jīng)斷傷吻合后面部運動功能恢復的實驗研究 目的觀察大鼠面神經(jīng)損傷修復后的行為學、功能學恢復過程，為面神經(jīng)損傷修復研究提供客觀的實驗性功能評估手段。方法大鼠面神經(jīng)斷傷吻合建立外傷性面癱模型，術(shù)后每周觀察觸須拂動、角膜吹氣誘發(fā)的瞬目動作等面部運動，記錄健患兩側(cè)面神經(jīng)電圖(ENoG)與瞬目反射(BR)的變化。結(jié)果術(shù)后患側(cè)觸須拂動與瞬目動作消失，但立即出現(xiàn)觸須細微的顫抖，術(shù)后1月左右面部運動開始恢復，2月時可出現(xiàn)耳周

2、肌肉的聯(lián)帶運動。ENoG檢測發(fā)現(xiàn)，傷后患側(cè)復合肌肉動作電位(CAMP)仍可引出，術(shù)后21天時潛伏期開始延長，1月時達高峰并開始恢復，3-4月后基本穩(wěn)定但仍不能恢復至健側(cè)正常水平，其中21-63天時延長的潛伏期值與其它各時間點相比差異有顯著性(P＜0.05)?；紓?cè)CAMP的振幅與刺激強度變化無明顯規(guī)律性，潛伏期、振幅與刺激強度三值間也無相關(guān)性。BR檢測發(fā)現(xiàn)，患側(cè)R1波在術(shù)后7、14天時消失，1月后恢復檢出，術(shù)后2月左右同側(cè)口輪匝肌處可以記

3、錄到提示聯(lián)帶運動的R1樣肌電反射波(R1oris)，R1oris與同時記錄的R1潛伏期值呈一致性下降趨勢，2月時的R1oris潛伏期值與此后各時點值間的差異有顯著性。結(jié)論神經(jīng)電圖和瞬目反射的檢測方法有助于反映面癱模型大鼠的面部行為學恢復過程，但仍有待于進一步研究完善。 第二部分 損傷修復過程中面運動神經(jīng)元定位分布變化研究 目的觀察面神經(jīng)斷傷吻合后再生修復過程中，面運動神經(jīng)元的定位分布與再生達靶支配變化，探討其在聯(lián)

4、帶等面癱后遺癥發(fā)生中的可能作用。方法建立大鼠面神經(jīng)斷傷吻合模型，采用尼氏染色與神經(jīng)逆行熒光示蹤技術(shù)，觀察術(shù)后60、90與120天時健患兩側(cè)面運動神經(jīng)元的定位分布與再生支配變化。結(jié)果(1)傷后健側(cè)尼氏染色與熒光金(FG)逆行示蹤標記的面運動神經(jīng)元分布特征與數(shù)量無變化。而患側(cè)代表成功再生達靶的FG標記神經(jīng)元數(shù)目較尼氏染色標記的神經(jīng)元數(shù)目明顯減少(P＜0.05)，術(shù)后60、90與120天時FG標記的神經(jīng)元數(shù)目變化不明顯。健患兩側(cè)尼氏染色神經(jīng)元

5、的數(shù)量及分布特征基本一致，僅有神經(jīng)元分布區(qū)域的輕微縮小趨勢，未發(fā)現(xiàn)傷后神經(jīng)元有壞死與調(diào)亡表現(xiàn)。(2)FG與熒光紅(FR)神經(jīng)逆行雙標發(fā)現(xiàn)，面神經(jīng)的顳支主要由背側(cè)亞核區(qū)運動神經(jīng)元支配，以背內(nèi)、外側(cè)亞核為主；頰支則主要由各中間亞核、外側(cè)亞核及少部分背外側(cè)亞核支配，健患兩側(cè)頰支支配區(qū)內(nèi)均可見支配顳支的錯位神經(jīng)元存在，其分別占同側(cè)示蹤神經(jīng)元總數(shù)的比例之間差異無顯著性(P＞0.05)，提示雜亂再生的熒光雙標記神經(jīng)元僅出現(xiàn)于患側(cè)。結(jié)論面神經(jīng)損傷修復

6、晚期，可能存在再生達靶不成功但仍處于存活狀態(tài)的運動神經(jīng)元，這類的神經(jīng)元結(jié)構(gòu)與功能意義值得深入研究。在面神經(jīng)損傷修復與后遺癥產(chǎn)生機制中，除有軸索過度芽生與錯靶支配可能外，面神經(jīng)核高興奮性、假突觸傳遞等的作用也有待研究證實。 第三部分 損傷修復過程中面運動神經(jīng)元興奮性調(diào)控的塑形改變 目的觀察面神經(jīng)損傷修復過程中，面運動神經(jīng)元突觸傳入與神經(jīng)遞質(zhì)受體的塑形改變，探討其在傷后面神經(jīng)核運動信息調(diào)控中的可能作用。方法建立大鼠面

7、神經(jīng)斷傷吻合模型，術(shù)后0、7、21、60天時，分別用免疫組織化學與RT-PCR技術(shù)，觀察面神經(jīng)核內(nèi)突觸體素(p38)、谷氨酸神經(jīng)遞質(zhì)受體亞單位(NMDAR2A與GluR2)的表達變化，同時用透射電鏡技術(shù)觀察術(shù)后90天時面運動神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)改變與突觸數(shù)量變化。結(jié)果面神經(jīng)核內(nèi)代表突觸活性與數(shù)量的p38表達于面運動神經(jīng)元胞體與樹突結(jié)構(gòu)上，傷后患側(cè)的免疫反應強度明顯減弱(p＜0.05)，7天時最低，21天后有輕微升高。面神經(jīng)核區(qū)腦組織內(nèi)可檢測

8、出NMDAR2A與GluR2的mRNA表達，兩者表現(xiàn)出不同的表達強度變化，前者在傷側(cè)的表達水平顯著降低(p＜0.05)，而后者無顯著性變化(p＞0.05)。超微結(jié)構(gòu)觀察發(fā)現(xiàn)面運動神經(jīng)元無壞死與凋亡樣結(jié)構(gòu)改變，但其突觸結(jié)構(gòu)的數(shù)量減少。結(jié)論面神經(jīng)損傷修復過程中，面運動神經(jīng)元的突觸傳入末梢出現(xiàn)相應塑形改變，谷氨酸神經(jīng)遞質(zhì)受體組成也呈現(xiàn)不同的表達改變，從而適應傷后面運動神經(jīng)元興奮性的改變，并可能直接影響面神經(jīng)功能恢復并導致面癱等后遺癥的發(fā)生。

9、 第四部分 面神經(jīng)損傷修復過程中星形膠質(zhì)細胞塑形活動研究 目的觀察面神經(jīng)損傷修復過程中面運動神經(jīng)元周圍星形膠質(zhì)細胞塑形活動。方法大鼠面神經(jīng)斷傷吻合后0、7、21、60天時，觀察面部運動恢復變化同時，分別用免疫組織化學、神經(jīng)逆行示蹤結(jié)合免疫熒光組織化學的雙重標記技術(shù)以及透射電鏡技術(shù)，觀察外周損傷后面神經(jīng)核內(nèi)膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(GFAP)、連接蛋白(Cx43與Cx32)表達以及星形膠質(zhì)細胞的超微結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果面神經(jīng)損傷

10、修復過程中面部運動功能逐漸恢復，但難以完全恢復正常，且常伴有面癱后遺癥聯(lián)帶。熒光金(FG)逆行示蹤標記的面運動神經(jīng)元具有明顯的亞區(qū)分布特征。正常狀態(tài)下面神經(jīng)核區(qū)GFAP表達強度極弱，術(shù)后7天時患側(cè)表達強度顯著增強，至再生修復晚期減弱，但仍高于健側(cè)水平。Cx43表達于星形膠質(zhì)細胞與神經(jīng)元，而Cx32則主要表達于神經(jīng)元內(nèi)。面神經(jīng)損傷后，患側(cè)Cx43/32的表達強度均較健側(cè)增高，以Cx43為明顯，21天后表達強度開始降低。超微結(jié)構(gòu)觀察表明，術(shù)