免疫調(diào)節(jié)肽對(duì)白血病細(xì)胞增殖、凋亡與分化的作用研究.pdf

1、胸腺肽α<,1>(Tα<,1>)，是一種包含28個(gè)氨基酸序列的多肽，在許多疾病的治療中作為免疫增強(qiáng)劑使用。本實(shí)驗(yàn)我們研究Tα<,1>對(duì)三種白血病細(xì)胞株(HL-60細(xì)胞，K562細(xì)胞和K562/ADM細(xì)胞)的增殖和凋亡的作用。方法：應(yīng)用生長(zhǎng)曲線測(cè)定法，檢測(cè)不同濃度的Tα<,1>對(duì)三種白血病細(xì)胞株(HL-60細(xì)胞，K562細(xì)胞和K562/ADM細(xì)胞)增殖的影響；采用Wright’s-Giemsa 染色觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化；用流式細(xì)胞儀檢測(cè)T

2、α<,1>對(duì)白血病細(xì)胞凋亡率的影響以及對(duì)細(xì)胞CD95(Fas/Apol)和bcl-2基因表達(dá)的影響；利用乙酰膽堿受體拮抗實(shí)驗(yàn)研究Tα<,1>對(duì)白血病細(xì)胞的作用機(jī)制。結(jié)果：Tα<,1>孵育白血病細(xì)胞96h后，細(xì)胞的增殖得到明顯抑制，細(xì)胞形態(tài)表現(xiàn)出明顯的凋亡特征，如染色質(zhì)濃縮，出現(xiàn)凋亡小體等：另外在凋亡的細(xì)胞中觀察到CD95(Fas/Apol)表達(dá)的上調(diào)，bcl-2抑凋亡基因表達(dá)的減少；Tα<,1>能微弱的抑制K562/ADM細(xì)胞 P-糖蛋

3、白(P-gp)的表達(dá)和功能；對(duì)于Tα<,1>的作用，K562細(xì)胞和K562/ADM細(xì)胞要比HL-60細(xì)胞敏感，而三種白血病細(xì)胞株要比肝癌細(xì)胞株HepG-2更敏感；D-tubocurarine(TUB)，一種nAchRs拮抗劑，能顯著拮抗Tα<,1>對(duì)白血病細(xì)胞增殖的抑制作用，而阿托品，一種mAchRs拮抗劑卻沒(méi)有這種拮抗作用。這些結(jié)果顯示，Tα<,1>能明顯抑制白血病細(xì)胞的增殖和誘導(dǎo)其凋亡，這種作用是通過(guò)N型乙酰膽堿受體的活化實(shí)現(xiàn)的。

4、 胸腺五肽(Arg-Lys-Asp-Val-Tyr，TP5)是人工合成的，在人體內(nèi)具有免疫調(diào)節(jié)活性的五肽。本實(shí)驗(yàn)主要研究TP5在體外對(duì)人白血病細(xì)胞株HL-60、K562和K562/ADM細(xì)胞增殖、凋亡與分化的影響。方法：應(yīng)用生長(zhǎng)曲線測(cè)定法，檢測(cè)不同濃度的TP5對(duì)HL60、K562和K562/ADM細(xì)胞增殖的影響；采用半固體培養(yǎng)基中克隆形成實(shí)驗(yàn)，檢測(cè) TP5 對(duì)細(xì)胞惡性增殖的抑制作用；硝酸銀染色檢測(cè)AgNORs變化；根據(jù)硝基藍(lán)四氮唑

5、(NBT)還原能力和聯(lián)苯胺染色來(lái)測(cè)定白血病細(xì)胞的分化；用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期的分布，凋亡率的變化以及細(xì)胞表面抗原CD11b，CD14表達(dá)，觀察TP5對(duì)白血病細(xì)胞(HL60和K562)凋亡與分化的作用；利用乙酰膽堿受體拮抗實(shí)驗(yàn)研究TP5對(duì)HL60細(xì)胞的作用機(jī)制；利用試劑盒測(cè)定白血病細(xì)胞 TNF 的分泌和細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶的活性。結(jié)果：TP5 能濃度依賴性地抑制HL60細(xì)胞的增殖和半固體培養(yǎng)基中的克隆形成；TP5 作用后能夠使HL60細(xì)胞內(nèi)

6、的 AgNORs 減少或消失；細(xì)胞周期分析發(fā)現(xiàn)，不同濃度的 TP5 對(duì)HL60 細(xì)胞增殖的抑制，伴隨著細(xì)胞進(jìn)程阻滯于 G0/G1期；TP5能顯著增強(qiáng)HL60細(xì)胞NBT還原能力；用流式細(xì)胞儀熒光染色分析，TP5能誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞向粒細(xì)胞分化；TUB能明顯拮抗 TP5對(duì)HL60 細(xì)胞的增殖的抑制作用，而阿托品卻沒(méi)有這種拮抗作用，說(shuō)明TP5通過(guò)N型乙酰膽堿受體的活化抑制HL60細(xì)胞的增殖。TP5能濃度依賴性地抑制K562細(xì)胞的惡性增殖和半固