大黃素對白血病細(xì)胞株U937增殖、凋亡的影響及機(jī)制探討.pdf

1、目的:①研究中藥大黃素(Emodin)對人髓系白血病U937細(xì)胞株增殖、凋亡的影響。②觀察對U937細(xì)胞增殖、凋亡相關(guān)基因及蛋白表達(dá)的影響，探討其作用機(jī)制。③大黃素作用后對細(xì)胞P13K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中蛋白表達(dá)的變化。 方法:應(yīng)用MTT法繪制細(xì)胞生長曲線；克隆形成試驗觀察大黃素對U937細(xì)胞增殖的影響；AO-EB熒光染色、線粒體膜電位檢測、DNA倍體分析及DNA凝膠電泳分析細(xì)胞凋亡及周期變化；流式細(xì)胞術(shù)測定大黃素作用前后ca

2、spase-3活性變化；RT-PCR檢測大黃素作用前后Bcl-2、Bax、h-TERT、pim-2、c-myc、TGF-β1、survivin、P21、Mcl-1、野生型P53基因mRNA表達(dá)水平的變化，蛋白印跡法(Western-Blot)檢測Bcl-2、Bax、h-TERT、cyclinDl、procaspase-3和PARP蛋白以及Akt、pAkt、NF-κB(p65)和pNF-κB(pp65)蛋白表達(dá)水平的變化。 結(jié)果:

3、細(xì)胞生長曲線及克隆形成實驗結(jié)果顯示大黃素能抑制U937細(xì)胞增殖，作用72dx時的半數(shù)抑制濃度(IC<,50>)約為30μM；U937細(xì)胞核內(nèi)濃縮聚集的染色質(zhì)、線粒體膜電位的改變、亞G1峰(凋亡峰)及DNA片段化的檢出證實大黃素能誘導(dǎo)U937細(xì)胞凋亡，并呈量效關(guān)系。大黃素作用后G0/G1期細(xì)胞比例較對照組增高，S期比例下降，且與藥物濃度呈正相關(guān)。大黃素作用后caspase-3活性增高，并呈時效關(guān)系。同時U937細(xì)胞Bcl-2、c-myc、

4、h-TERT、pim-2、Survivin基因mRNA表達(dá)隨著作用時間的延長而逐漸減少；Bax、野生型P53、P21、TGFl31基因mRNA表達(dá)隨著作用時間的延長而逐漸升高；mcl-1基因表達(dá)無明顯改變。Western-Blot的結(jié)果顯示Bcl-2、Bax、h-TERT、cyclinDl、procaspase-3、116KD的PARP、pAkt、NF-κB(p65)和pNF-κB(pp65)蛋白的表達(dá)水平均下降，并且隨作用時間延長，表

5、達(dá)下降更明顯；而PARP蛋白的85kd的裂解片段逐漸增高，Akt蛋白表達(dá)無明顯改變。 結(jié)論:大黃素可抑制U937細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)其凋亡，在一定濃度范圍內(nèi)呈劑量時間效應(yīng)關(guān)系，并將細(xì)胞阻滯于G0/G1期，可能是通過下調(diào)Bcl-2、c-myc、h-TERT、pim-2、Survivin、procaspase-3、cyclinDl、PAkt、NF-κB(p65)、pNF-κB(pp65)mRNA和/或蛋白表達(dá)，上調(diào)Bax,野生型P53、P