雞貯精腺差異表達基因的研究.pdf

1、禽類品種間和個體間的性狀差異本質(zhì)上都是由于基因種類的差異和基因表達量的差異所致。對同一個體不同組織或不同個體相同組織的基因表達差異進行比較研究，可獲得與生命過程相關(guān)的信息，揭示不同性狀的發(fā)生發(fā)展機理。 禽類輸卵管的子宮陰道交接部存在一種特殊的管狀腺，該腺體由單層柱狀上皮細胞構(gòu)成，腺管細胞頂部無纖毛，細胞核排列整齊，位于細胞的基部，因精子在此貯存而被稱為貯精腺。貯精腺的存在使禽類精子在輸卵管內(nèi)可以長期存活，并能長時間保持受精能力。

2、自貯精腺被發(fā)現(xiàn)以來，人們從貯精腺的組織學(xué)和生殖生理學(xué)等方面進行了廣泛的研究，但這些研究還不足以解釋貯精腺的貯精機理。 本實驗利用mRNA差異顯示技術(shù)，以29bp的10條錨定引物和25bp的10條隨機引物進行DDRT-PCR分析不同處理及不同持續(xù)受精能力的母雞的貯精腺組織。通過對100個引物組合的篩選后發(fā)現(xiàn)有63 對引物組合的擴增效果較好，其中有差異條帶的引物組合有23對，共獲得差異條帶30條，二次擴增重復(fù)出現(xiàn)的差異條帶有13條，

3、通過克隆、測序及序列分析，獲得6個ESTs序列。 對獲得的6個ESTs序列進行基因信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)：SST01部分序列與雞第2號染色體上的Neurexophilin基因的一部分相似，其同源性達97.8％，推測SST01與貯精腺生理功能的神經(jīng)調(diào)控有關(guān)；SST02部分序列與雞第3號染色體上的絲裂素活化蛋白激酶基因的一部分相似，其同源性達98.7％，推測SST02與貯精腺上皮細胞的增殖、分化有關(guān)；SST03部分序列與雞第8號染色體上磷脂

4、酰肌醇蛋白聚糖基因的一部分相似，其同源性達98.5％，推測SST03與細胞的生長分化有關(guān)；其他3個ESTs序列與雞己有核酸數(shù)據(jù)庫中的eDNA克隆或EST具有較高相似性，可認為是雞的新EST序列，但其功能未知。 利用半定量RT-PCR檢測SST01、SST04和SST05的EST序列的，發(fā)現(xiàn)這些ESTs表達的上調(diào)與貯精腺貯精能力增強有關(guān)，但這些ESTs的全序列信息及其功能以及作用方式還不清楚，這些都有待今后進一步的研究。通過本實驗