雞ERα基因胚胎組織表達(dá)差異及其啟動子活性分析.pdf

1、禽類作為研究其他脊椎動物的重要模式生物，其性別分化和性腺發(fā)育的相關(guān)研究一直是發(fā)育生物學(xué)的研究熱點(diǎn)。性激素在性別分化和性腺發(fā)育方面起到了重要的作用，有研究表明雌激素合成的關(guān)鍵酶芳香化酶可以導(dǎo)致雄性雞胚的雌性化，這說明雌激素在雞胚早期性腺發(fā)育中起到重要作用。
　　雞雌激素受體cERα基因有五個(gè)啟動子，分別啟動轉(zhuǎn)錄形成多個(gè)5'UTR不同的cERα mRNA剪切體，本研究擬對雞胚胎期cERα基因的多個(gè)剪切體進(jìn)行研究，用實(shí)時(shí)熒光量PCR的方

2、法對cERα基因多個(gè)剪切體在雞胚五個(gè)時(shí)期八個(gè)組織中的表達(dá)情況進(jìn)行檢測。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明cERα基因的B、C、D三種剪切體在雞胚五個(gè)時(shí)期(E10.5、E12.5、E14.5、E16.5、E18.5)八個(gè)組織（心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腦泡、肌肉、性腺）中均有表達(dá)，在性腺中表達(dá)量最高，且在雌雄兩性中呈現(xiàn)表達(dá)差異，均為雌性表達(dá)量高于雄性;根據(jù)cERα基因的B、C、D三種剪切體均在性腺中高表達(dá)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，進(jìn)一步對三種剪切體在性腺中的

3、相對表達(dá)情況進(jìn)行了定量檢測，發(fā)現(xiàn)三種剪切體在不同時(shí)期性腺中的相對表達(dá)趨勢基本一致，且雌性均在E14.5時(shí)表達(dá)量下調(diào)，三種剪切體的相對表達(dá)水平表現(xiàn)為C＞D＞B;同時(shí)使用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)的方法在CEF、DF1和PK15三種細(xì)胞系中對六個(gè)啟動子(A1、A2、A12、B、C、D)重組載體進(jìn)行了活性檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在CEF、DF1細(xì)胞中均檢測到了啟動子活性，PK15細(xì)胞中沒有檢測到啟動子活性。CEF細(xì)胞中啟動子重組載體相對活性表現(xiàn)為D＞B＞C