MEF差異表達基因的篩選.pdf

1、該課題主要應用抑制性消減雜交技術構建培養(yǎng)后MEF細胞相對于原代MEF細胞籌異表達基因的cDNA消減文庫,并運用生物信息學方法分析所獲得的實驗結果,以期查找出其中對ES細胞增殖分化有重要調控作用的基囚群.首先提取對培養(yǎng)前（driver）、后（t est er）的MEF mRNA,與商售的cDNA ExpressionArray尼龍雜交膜進行微陣列法雜交檢測,在已知基因范圍內進行初步分析.對培養(yǎng)前、后的MEFmRNA進行抑制性消減雜交分

2、析.將mRNA逆轉錄為cDNA,經Rsal酶切后將實驗組（tester）分為兩組,分別與2種不同的接頭連接,再與對照組（driver） cDNA進行兩次消減雜交及兩次抑制性PCR.將產物與pGEM-T載體連接,構建cDNA消減文庫,并轉染大腸桿菌進行文庫擴增,隨機挑取陽性克隆PCR擴增后進行測序與同源性分析.結果顯示,培養(yǎng)后MEF相對于胚胎成纖維細胞確實存在差異表達基因群,在微陣列法中檢測到24類差異表達的基因.抑制性差減雜交分析,成