同種異基因小鼠骨髓移植GVHD模型的建立和OGT2115對小鼠氣管移植排斥反應(yīng)的影響.pdf

1、[目的]
　　 1.探索同種異基因小鼠骨髓移植移植物抗宿主免疫排斥反應(yīng)(GVHD)動物模型的建立方法，優(yōu)化各種實驗條件，建立穩(wěn)定、典型的移植物抗宿主免疫排斥反應(yīng)動物模型，為骨髓移植GVHD的研究提供更好的技術(shù)平臺。
　　 2.建立同種小鼠氣管移植排斥反應(yīng)動物模型，為探討肺移植排斥反應(yīng)機(jī)制提供技術(shù)平臺。
　　 3.探討新型抗腫瘤藥物乙酰肝素酶抑制劑(OGT2115)在氣管移植后管腔纖維化閉塞發(fā)生中的作用，為降低氣管

2、移植排斥反應(yīng)，提高肺移植成功率提供新的防治措施。
　　 [方法]
　　 1.取C57BL/6雄性供鼠的脾細(xì)胞及骨髓細(xì)胞，將其按骨髓細(xì)胞/脾細(xì)胞=1∶1、骨髓細(xì)胞/脾細(xì)胞=1∶2的比例配制成相應(yīng)的細(xì)胞懸液，單純骨髓細(xì)胞懸液作對照，通過尾靜脈注射的方法將不同比例骨髓細(xì)胞/脾細(xì)胞懸液和單純骨髓細(xì)胞懸液分別注射入BALB/c骨髓移植雌性受鼠體內(nèi)，設(shè)立不注射細(xì)胞懸液的空白對照組。移植后每兩天對受鼠毛發(fā)改變、精神狀態(tài)、體重、背部改變

3、等GVHD的典型癥狀及開始出現(xiàn)的時間進(jìn)行詳細(xì)觀察，并檢測受鼠嵌合體形成及肝、肺和小腸的病理改變。
　　 2.取清潔級BALB/c雄鼠作為氣管移植受者，C57BL/6雄鼠作為供者。模型建立實驗分2組:同系對照組和異系移植組。同系對照組，將BALB/c雄性供鼠8個軟骨環(huán)長度的氣管移植同系雄性受鼠頸背部皮下“遂道”;異系移植組，將BALB/c雄性供鼠8個軟骨環(huán)長度的氣管移植至C57BL/6雄性受鼠頸背部皮下，每組移植6個氣管，每只受鼠

4、接受2個移植氣管。術(shù)后放入清潔級動物房飼養(yǎng)4周，取出移植氣管，檢測移植物的病理改變。
　　 3.將C57BL/6雄性受鼠隨即均分為對照組和實驗組，實驗組于移植手術(shù)前4小時第一次腹腔注射OGT2115，隨后每周注射3次。取BALB/c雄性供鼠8個軟骨環(huán)長度的氣管作為移植物，移植入受鼠頸背部皮下“遂道”，每只受鼠移植入2個氣管。4周后取出移植物和受鼠肝臟組織，進(jìn)行HE染色，觀察移植物和肝臟的病理改變，分析OGT2115對氣管移植后氣

5、管管腔纖維化閉塞的影響。
　　 [結(jié)果]
　　 1.骨髓移植后移植物抗宿主免疫排斥反應(yīng)(GVHD)動物模型的建立
　　 在骨髓移植2周左右受鼠出現(xiàn)了弓背、頸部脫毛、肛門紅腫、腹瀉等較典型的GVHD癥狀;BMC/SC=1∶2組受鼠平均生存時間為11天，BMC/SC=1∶1組受鼠平均生存時間15天，有2只一直存活至第5周;BMC/SC=1∶2組的受鼠GVHD癥狀較1∶1組更明顯更典型，但幾乎全部于移植后2周內(nèi)死亡;移

6、植后第5周從瀕死受鼠外周血白細(xì)胞提取DNA，PCR法成功檢測到了雄性供鼠180bp的SRY嵌合體條帶。HE染色結(jié)果顯示受鼠肝臟、肺及小腸均出現(xiàn)淋巴細(xì)胞浸潤現(xiàn)象。
　　 2.同種小鼠氣管移植動物模型的建立
　　 術(shù)后4周移植氣管HE染色結(jié)果顯示同系對照組氣管腔僅見少量粘液，未出現(xiàn)纖維化閉塞及成纖維細(xì)胞增生，而異系移植組氣管均出現(xiàn)了管腔的纖維化閉塞及成纖維細(xì)胞增生，但移植氣管均未出現(xiàn)感染情況，說明小鼠頸背部氣管移植適合于建立

7、同種氣管移植動物模型。
　　 3.乙酰肝素酶抑制劑OGT2115對同種氣管移排斥反應(yīng)的影響
　　 HE染色結(jié)果顯示OGT2115注射組在氣管移植后第4周均未出現(xiàn)管腔閉塞現(xiàn)象，亦無纖維化增生，而對照組全部出現(xiàn)管腔閉塞和纖維化增生，說明OGT2115對氣管移植后的管腔纖維化堵塞有較強(qiáng)的抑制作用，病理檢查顯示OGT2115注射組受鼠肝臟亦無明顯的病理改變。
　　 [結(jié)論]
　　 1.本研究成功制備了骨髓移植GV