中藥腎華對(duì)5-6腎切除大鼠腎保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景與目的：各種慢性腎臟病進(jìn)展至慢性腎衰的病理改變均以彌漫性腎小球硬化和間質(zhì)纖維化為特征。健存腎單位代償性增生和高濾過(guò)導(dǎo)致腎小球硬化和間質(zhì)纖維化進(jìn)一步加重。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACEI)和血管緊張素Ⅱ受體阻斷劑(ARB)可以打破這一惡性循環(huán)，延緩疾病的進(jìn)展。近來(lái)年發(fā)現(xiàn)腎臟局部的炎癥反應(yīng)與腎小球、腎小管間質(zhì)及腎功能的損傷程度密切相關(guān)。無(wú)論是免疫機(jī)制還是非免疫機(jī)制啟動(dòng)的腎損傷，多數(shù)都伴有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。局部浸潤(rùn)的炎細(xì)胞和活化的腎臟固有細(xì)

2、胞可以產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，促進(jìn)腎小球硬化和間質(zhì)纖維化的進(jìn)程。因此抑制腎臟局部的免疫炎癥反應(yīng)可能是延緩慢性腎病進(jìn)展的有效方法。治療慢性腎炎的中成藥腎華片含有多種具有免疫調(diào)節(jié)作用的成分。前期研究表明腎華可以抑制腎炎模型大鼠的炎癥反應(yīng)和系膜細(xì)胞增殖，減少細(xì)胞外基質(zhì)的積聚。因此，我們推測(cè)腎華可以通過(guò)抑制腎臟局部的炎癥反應(yīng)、細(xì)胞因子的表達(dá)，延緩慢性腎病的進(jìn)展。為此，本文首先觀察腎華對(duì)5/6腎切除模型大鼠慢性腎損害的療效，然后以腎臟局部的炎癥反應(yīng)和細(xì)

3、胞因子為切入點(diǎn)探討其作用機(jī)制。 材料與方法：雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組和手術(shù)組。手術(shù)組采用兩步法制備5/6腎切除模型后，再隨機(jī)分為模型對(duì)照組、伊貝沙坦組和腎華高、中、低劑量組。伊貝沙坦組和腎華高、中、低劑量組分別給予伊貝沙坦20mg.kg-1，腎華2，1，0.5g.kg-1，假手術(shù)組和模型對(duì)照組給予相應(yīng)量的蒸餾水，共治療12周。觀察大鼠的一般情況、體重、血壓、尿蛋白、血清膽固醇、甘油三酯、血清白蛋白、血清總蛋白、殘腎-

4、體重指數(shù)以及腎臟病理改變，并采用Northernblotting，Westernblotting和免疫組化法檢測(cè)腎組織中單核巨噬細(xì)胞抗原(ED-1)、增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)、巨噬細(xì)胞移行抑制因子(MIF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)，成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF-2)、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)和Ⅰ型膠原(COL-1)的表達(dá)。 結(jié)果：與模型對(duì)照組比較，腎華片可以顯著改善模型大鼠的一般情

5、況，降低24h尿蛋白排泄量(68.18±14.99mg/24hvs.120.47±45.13mg/24h，P＜0.01)，血清肌酐(67±5.90μmol/Lvs.193.44±106.78μmol/L，P＜0.05)，血清膽固醇濃度(2.85±0.41mmol.L-1vs.3.86±1.36mmol.L-1，P＜0.05)，升高血清白蛋白(30.43±3.57g.L-1vs.22.17±3.78g.L-1P＜0.05)，減輕腎小球硬化

6、(0.49±0.11vs.0.19±0.08，P＜0.05)及腎小管間質(zhì)病變(0.63±0.37vs.1.26±0.58，P＜0.05)程度，降低平均腎小球截面積，平均腎小球體積[(1.70±0.07)×106μm3vs.(2.12±0.06)×106μm3]和殘余腎臟的重量，但對(duì)大鼠的血壓、血清甘油三酯、殘腎-體重指數(shù)的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。隨著劑量的增加，腎華降尿蛋白、血清肌酐、減輕病理?yè)p害作用呈增強(qiáng)趨勢(shì)，而降血清膽固醇的作用呈下降趨勢(shì)

7、。 與模型對(duì)照組比較，腎華可以顯著降低殘余腎臟ED-1(每個(gè)腎小球截面ED-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)5.57±0.65vs.10.14±0.91，P＜0.01；腎小管間質(zhì)每高倍鏡視野陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)7.5±0.99vs.29.33±1.20，P＜0.01)、PCNA、α-SMA、TGF-β1(腎小球陽(yáng)性面積百分比4.49％±0.67％vs.10.86％±1.63％，P＜0.01；腎小管間質(zhì)1.47％±0.22％vs.9.59％±1.44％，P＜0

8、.01)、FGF-2、CTGF、MIF(腎小球陽(yáng)性面積比4.82％±0.77％vs.13.04％±2.09％P＜0.01；腎小管間質(zhì)陽(yáng)性面積百分比11.55％±1.96％vs.18.04％±3.07％，P＜0.01)和COL-1的表達(dá)水平。 結(jié)論：腎華片可以通過(guò)抑制腎組織的慢性炎癥反應(yīng)，抑制TGF-β1、FGF-2、CTGF以及MIF表達(dá)等機(jī)制，抑制系膜細(xì)胞和間質(zhì)成纖維細(xì)胞的增殖和細(xì)胞外基質(zhì)的合成，減輕腎小球硬化和腎小管間質(zhì)病變