重組人肝再生增強(qiáng)因子對(duì)5-6腎切除大鼠模型腎臟保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的:近年國(guó)內(nèi)外對(duì)重組人肝再生增強(qiáng)因子(rhALR)研究多集中在肝臟,它可以促進(jìn)肝臟再生、抗肝纖維化、抑制NK細(xì)胞活性等。因其在各組織器官中分布廣泛,其mRNA在睪丸組織、肝臟、腎臟、胸腺等器官均有表達(dá),不同的發(fā)育階段及其在組織分布上的差異,充分說明了rhALR生物功能的多樣性。研究發(fā)現(xiàn)rhALR可以促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解,發(fā)揮其抗肝纖維化作用,減輕肝細(xì)胞的損傷,促進(jìn)損傷肝細(xì)胞的恢復(fù),減輕細(xì)胞外基質(zhì)的過度積聚。根據(jù)慢性腎臟病與肝臟病的發(fā)生

2、發(fā)展過程中存在某些相似的途徑,推測(cè)其對(duì)于慢性腎衰竭腎臟具有保護(hù)作用。國(guó)內(nèi)外研究已證實(shí)rhALR直接或間接參與腎炎病理過程,急性腎小管損傷時(shí)刺激小管上皮細(xì)胞DNA合成等,但目前尚缺乏其在慢性腎衰竭的治療方面的研究。本課題擬在通過給予重組肝再生增強(qiáng)因子,同時(shí)觀察與慢性腎衰竭具有明確相關(guān)性的因子、蛋白的變化,以了解給予重組肝再生增強(qiáng)因子對(duì)于慢性腎衰竭的保護(hù)作用,為臨床治療提供新的思路。
　　 腎纖維化作為許多腎臟疾病的結(jié)局,是慢性腎衰

3、竭的病理基礎(chǔ)。腎纖維化包括腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化兩個(gè)方面。作為慢性腎衰竭的終末期表現(xiàn),其程度直接關(guān)系到慢性腎衰竭的程度及預(yù)后。腎小球硬化形成的主要原因是細(xì)胞外基質(zhì)在腎小球基底膜過度沉積,突出表現(xiàn)為細(xì)胞外基質(zhì)增加和腎固有細(xì)胞增生或消失。腎間質(zhì)纖維主要表現(xiàn)為腎小管萎縮消失,腎間質(zhì)單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)和纖維硬化。有關(guān)研究表明,血小板生長(zhǎng)因子(PDGF)是由血小板、單核巨噬細(xì)胞、腎小球系膜細(xì)胞(GMCs)和腎小管上皮細(xì)胞分泌的多肽因子。其家族包括P

4、DGF-AA、BB、CC和DD,其中PDGF-BB在腎小球硬化中作用尤為重要。其主要的生理作用是促進(jìn)DNA合成,在病理狀態(tài)下由單核巨噬細(xì)胞和腎組織固有細(xì)胞過度分泌,通過促進(jìn)GMCs增殖與分泌細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)增多,與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)發(fā)揮協(xié)同作用等途徑,從而導(dǎo)致腎小球硬化的發(fā)生。在腎小管上皮-間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程中,腎小管上皮細(xì)胞逐漸失去原有形態(tài),而表現(xiàn)出成纖維細(xì)胞的特征,如表達(dá)平滑肌肌動(dòng)蛋白(a-SMA)增加;同時(shí)細(xì)胞外基

5、質(zhì)不斷更新和降解的動(dòng)態(tài)平衡失調(diào),腎小管上皮細(xì)胞向間質(zhì)移行,通過刺激腎小管上皮細(xì)胞增殖,表型轉(zhuǎn)化或間質(zhì)成纖維細(xì)胞增殖,進(jìn)而導(dǎo)致過度分泌Ⅲ型膠原,使細(xì)胞外基質(zhì)過度聚積,從而導(dǎo)致腎間質(zhì)纖維化。
　　 本課題擬在通過研究rhALR對(duì)5/6腎切除模型大鼠PDGF-BB、a-SMA和Ⅲ型膠原表達(dá)的影響,從而探討其對(duì)5/6腎切除模型大鼠腎臟的保護(hù)作用。
　　 方法:
　　 隨機(jī)分為三組,假手術(shù)組(n=20),僅暴露腎包膜,不做

6、腎切除。手術(shù)組(n=40),在嚴(yán)格無菌條件下,切除右腎,一周后切除左腎2/3。手術(shù)組大鼠術(shù)后飼養(yǎng)一周后,隨機(jī)分為對(duì)照組(n=20),干預(yù)組(n=20)。干預(yù)組大鼠于手術(shù)后12周給予rhALR200μg/kg/d,腹腔注射,連續(xù)注射14天。于用藥結(jié)束后24小時(shí)殺死動(dòng)物,留取腎臟組織。
　　 檢測(cè)項(xiàng)目:1應(yīng)用血生化測(cè)定儀測(cè)定不同組肌酐、尿素氮值。2HE、Masson染色,光鏡下觀察腎臟病理學(xué)改變。3免疫組織化學(xué)法檢測(cè)PDGF-BB蛋

7、白、腎間質(zhì)平滑肌肌動(dòng)蛋白(a-SMA)、Ⅲ型膠原。4.Western印跡法檢測(cè)腎組織中PDGF-BB蛋白、腎間質(zhì)平滑肌肌動(dòng)蛋白(a-SMA)、Ⅲ型膠原表達(dá)。
　　 所有計(jì)量數(shù)據(jù)以-x±s表示,行正態(tài)性檢測(cè)及方差齊性檢驗(yàn),統(tǒng)計(jì)學(xué)處理組間比較應(yīng)用多個(gè)樣本的Q檢驗(yàn),統(tǒng)計(jì)學(xué)分析通過SPSS13.0 forWindows軟件完成。
　　 結(jié)果:
　　 光鏡下假手術(shù)組腎小球、腎小管結(jié)構(gòu)正常。對(duì)照組可見多個(gè)腎小球硬化,系膜區(qū)增

8、寬,系膜細(xì)胞明顯增生,病變腎小球周圍小管上皮細(xì)胞腫脹明顯或者萎縮,基底膜明顯增厚皺縮,腎間質(zhì)纖維化明顯。干預(yù)組系膜細(xì)胞增生較輕,纖維化程度較對(duì)照組明顯減輕。免疫組織化學(xué):假手術(shù)組腎組織PDGF-BB蛋白極少表達(dá),對(duì)照組和干預(yù)組較假手術(shù)組均增強(qiáng),均具有顯著差異(P＜0.05);假手術(shù)組腎組織a-SMA蛋白僅在腎小動(dòng)脈壁表達(dá),腎小球和腎間質(zhì)幾乎無表達(dá)。對(duì)照組和干預(yù)組腎小球內(nèi)、腎小管和腎間質(zhì)均可見陽性表達(dá),與假手術(shù)組比較具有顯著差異(P＜0.

9、05);假手術(shù)組腎組織Ⅲ型膠原在腎小管上皮和間質(zhì)少量沉積,對(duì)照組和干預(yù)組腎小管和腎間質(zhì)Ⅲ型膠原沉積成條索狀或小片狀分布,較假手術(shù)組表達(dá)顯著增強(qiáng),具有顯著差異(P＜0.05)。3項(xiàng)指標(biāo)干預(yù)組較對(duì)照組明顯減弱,具有顯著差異(P＜0.05)。Western-blot結(jié)果:假手術(shù)組腎組織PDGF-BB蛋白極少表達(dá),對(duì)照組和干預(yù)組表達(dá)均明顯增強(qiáng),具有顯著差異(P＜0.05):假手術(shù)組腎組織a-SMA表達(dá)較少。對(duì)照組和干預(yù)組表達(dá)量明顯增強(qiáng),具有顯著