99Tcm-survivin mRNA反義肽核酸基因顯像在腫瘤與炎性反應(yīng)模型中的對(duì)比研究.pdf

1、目的:制備99Tcm標(biāo)記的survivin mRNA反義肽核酸(peptic nucleic acid,PNA)探針,對(duì)比其在荷A549肺癌裸鼠模型及金黃色葡萄球菌炎性反應(yīng)小鼠模型中的體內(nèi)生物學(xué)分布及顯像情況,探討99Tcm-survivin mRNA反義肽核酸在腫瘤早期特異性診斷中的價(jià)值。
　　 方法:
　　 以survivin mRNA240～251位堿基序列為靶序列人工合成survivin mRNA反義PNA(5'

2、-CCCAGCCTTCCA-3'),在其5'端連接上四個(gè)氨基酸Gly-(D)Ala-Gly-Gly-,并引入一個(gè)γ-氨基丁酸(4-aminobutyric acid,Aba)作為隔離物消除空間阻礙,形成結(jié)構(gòu)為Gly-(D)Ala-Gly-Gly-Aba-5'-CCCAGCCTTCCA-3'的survivin反義PNA化合物,再利用配體交換法對(duì)其進(jìn)行99Tcm標(biāo)記。用聚酰胺凝膠薄膜法和高效液相色譜儀(high performance li

3、quid chromatography,HPLC)測(cè)定其標(biāo)記率及穩(wěn)定性。培養(yǎng)大量人肺腺癌細(xì)胞(A549),取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的A549細(xì)胞用生理鹽水制成細(xì)胞懸液,注射于每只BALB/c裸鼠的右前肢背側(cè)皮下,SPF級(jí)(specific pathogen free,無(wú)特定病原體)環(huán)境下飼養(yǎng),成瘤后約4～5周腫瘤長(zhǎng)至直徑約1～1.5cm,制成荷瘤裸鼠模型。
　　 取長(zhǎng)勢(shì)良好的金黃色葡萄球菌菌落制成生理鹽水懸液,注射于每只昆明小鼠的右前肢背側(cè)肌

4、肉,48h后小鼠注射部位出現(xiàn)紅、腫、活動(dòng)障礙,制成炎性反應(yīng)小鼠模型。
　　 選取瘤體大小相近,形態(tài)規(guī)整的20只荷瘤裸鼠,按隨機(jī)數(shù)字法將其分為4組,每組5只。隨機(jī)選取其中3組(1h組、2h組、4h組),每只裸鼠經(jīng)尾靜脈注入0.1ml約555KBq(15μCi)99Tcm-survivin mRNA反義PNA,分別于注射后1h、2h、4h眼靜脈采血后,脫頸椎處死,取心、肝、肺、脾、腎、小腸、胃、骨骼、肌肉、腫瘤組織等稱重后進(jìn)行γ計(jì)數(shù)

5、,同時(shí)測(cè)量?jī)蓚€(gè)標(biāo)準(zhǔn)源的放射性計(jì)數(shù)。計(jì)算每克組織的百分注射劑量率(percentage activity of injection dose per gram of tissue,％ID/g)及腫瘤/肌肉(target to non-target,T/NT)比值。剩余1組(5只),每只裸鼠經(jīng)尾靜脈注入0.1ml約37MBq(1mCi)99Tcm-survivin mRNA反義PNA分別于1、2、4h行SPECT靜態(tài)顯像。同樣的方法處理炎性

6、反應(yīng)組昆明小鼠。采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。所有計(jì)量資料結(jié)果以x-±s表示,兩組間計(jì)量資料比較采用兩個(gè)獨(dú)立樣本的成組t檢驗(yàn),P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 99Tcm-survivin mRNA反義PNA的即刻標(biāo)記率為(94.89±2.73)％,標(biāo)記化合物在室溫下放置4h后標(biāo)記率無(wú)明顯變化,標(biāo)記率仍＞95％。標(biāo)記物經(jīng)HPLC測(cè)定呈單峰。99Tcm-survivin mRNA反義PNA在荷

7、瘤裸鼠的肝臟、腎臟中放射性分布最高,其次是脾、腸道、腫瘤;其它組織中放射性分布較少。在炎性反應(yīng)小鼠體內(nèi)亦是肝臟、腎臟放射性分布最高;其次是脾、腸道、胃;其它組織中放射性分布較少。經(jīng)尾靜脈注射99Tcm-survivinmRNA反義PNA后0.5h即可見(jiàn)腫瘤部位放射性聚集,隨時(shí)間延長(zhǎng)濃聚程度增強(qiáng),至4h時(shí)顯像較清晰,而炎性反應(yīng)部位各時(shí)間點(diǎn)顯影均較淡。將99Tcm-survivin mRNA反義PNA在腫瘤組與炎性反應(yīng)組各時(shí)間點(diǎn)T/NT值進(jìn)

8、行比較,結(jié)果顯示:腫瘤組各時(shí)間點(diǎn)T/NT值均高于炎性反應(yīng)組,其中注射后4h腫瘤組與炎性反應(yīng)組T/NT比值分別為3.69±1.13和2.03±0.47,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.01,p=0.02)。
　　 結(jié)論:
　　 99Tcm-survivin mRNA反義PNA具有良好的生物學(xué)的性能,可在荷瘤裸鼠體內(nèi)與高表達(dá)survivin基因的人肺癌A549腫瘤組織特異性結(jié)合,在炎性反應(yīng)動(dòng)物模型中攝取不明顯,99Tcm-surv