豬鏈球菌2型毒力相關(guān)蛋白的原核表達(dá)及體外試驗(yàn)評(píng)估重組蛋白的免疫源性和保護(hù)性.pdf

1、豬鏈球菌 2 型(Streptococcus suis type2)是一種重要的人獸共患病原菌，豬鏈球菌的發(fā)病機(jī)制至今仍不十分清楚，能否研制出針對(duì)我國致病豬鏈球菌2型的有效疫苗和診斷試劑直接關(guān)系著豬鏈球菌病在我國的有效預(yù)防和控制。目前豬鏈球菌疫苗主要有3種類型：減毒活疫苗；已發(fā)現(xiàn)的毒力因子；具有免疫原性的細(xì)胞壁膜蛋白。本人所在的課題組應(yīng)用免疫蛋白質(zhì)組技術(shù)體系開展了一定的工作，目前已經(jīng)鑒定了31個(gè)豬鏈球菌2型新的免疫原性抗原分子。

2、 在此基礎(chǔ)上針對(duì)這些鑒定出的候選分子設(shè)計(jì)引物，以98江蘇人源分離株98-149菌株基因組為模板，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增基因片段，定向克隆至pET232a(+)表達(dá)載體中。重組質(zhì)粒經(jīng)限制性酶切鑒定和測序，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21，IPTG誘導(dǎo)后，獲得了重組蛋白的高效表達(dá)。蛋白經(jīng)過鎳親和層析柱層析，獲得純化的重組蛋白。使用Westen-blot驗(yàn)證了它們的免疫原性后以重組蛋白免疫Wistar大鼠，獲得抗血清并測定滴度大于等于10<'5>閩按ELI