STK15基因在膀胱腫瘤中的表達(dá)及其單核苷酸多態(tài)性與膀胱腫瘤易感性的研究.pdf

1、膀胱移行細(xì)胞癌是泌尿系統(tǒng)腫瘤最常見的惡性腫瘤，其中70％-80％為淺表性膀胱癌，95％為高危淺表性膀胱癌。膀胱癌像其他多數(shù)腫瘤，從正常向惡性細(xì)胞轉(zhuǎn)化涉及到多個(gè)步驟。順序出現(xiàn)不同基因的變化，包括癌基因、抑癌基因、細(xì)胞周期基因和DNA修復(fù)基因的改變。 STK15基因是一種與中心體異常緊密相關(guān)的基因。在許多研究中都發(fā)現(xiàn)，STK15基因在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中發(fā)生基因擴(kuò)增、表達(dá)增高時(shí)，可以引起中心體數(shù)目、形態(tài)、大小和功能異常，形成多極紡錘體，導(dǎo)

2、致染色體的分離異常而形成非整倍體。 近年來的研究發(fā)現(xiàn)STK15在多種惡性腫瘤中高表達(dá)，國內(nèi)外文獻(xiàn)主要涉及了食管癌、乳腺癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、喉癌、胰腺癌、前列腺癌、肺癌、肝癌等的研究，國外資料有關(guān)STK15基因在膀胱癌中的研究極少，國內(nèi)文獻(xiàn)尚未有涉及膀胱癌。這一方面印證了該基因在多種腫瘤發(fā)生中的重要作用，同時(shí)提示我們應(yīng)針對(duì)它在多大程度上影響了膀胱癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)開展廣泛研究。 為了探索STK15基因在膀胱癌細(xì)胞系中及其在膀胱癌

3、不同分級(jí)組織中的表達(dá)情況，了解STK15基因在膀胱癌發(fā)生與發(fā)展中的作用，探討STK15基因Phe31Ile單核苷酸多態(tài)與膀胱癌風(fēng)險(xiǎn)是否有相關(guān)性?本文進(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn)研究：1.研究EJ、5637、T24三種膀胱腫瘤細(xì)胞株STK15基因的mRNA與蛋白水平的表達(dá)情況；2.研究膀胱癌不同分級(jí)組織中的STK15 mRNA與蛋白水平表達(dá)：分析STK15在膀胱癌發(fā)生與發(fā)展中的作用；3.研究STK15基因Phe 31lle 單核苷酸多態(tài)與膀胱癌風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)

4、系。 第一部分膀胱腫瘤細(xì)胞株中STK15的表達(dá) 目的：本部分探討EJ、5637、T24 三種膀胱腫瘤細(xì)胞株及正常膀胱粘膜組織中STK15基因的mRNA與蛋白水平的表達(dá)情況。 方法： 應(yīng)用RT-PCR和Westemblot方法分析EJ、5637、T24三種膀胱腫瘤細(xì)胞株STK15基因mRNA與蛋白的表達(dá)情況，探討不同膀胱腫瘤細(xì)胞株中STK15基因mRNA與蛋白的表達(dá)的關(guān)系。 結(jié)果： 1.通過

5、RT-PCR檢測(cè)，EJ、5637、T24 膀胱腫瘤細(xì)胞株STK15mRNA是高表達(dá)，三種膀胱腫瘤細(xì)胞株的STK15/GAPDH比值分別為：1.5839、1.4096、1.3148。在正常膀胱組織中無表達(dá)。 2.通過Westemblot檢測(cè)三種膀胱腫瘤細(xì)胞株STK15蛋白同樣是高表達(dá)，三種膀胱腫瘤細(xì)胞株均出現(xiàn)STK15蛋白表達(dá)的陽性條帶，其STK15/GAPDH比值分別為：5.13(EJ)、3.96(5637)、1.5(T24)，

6、在正常膀胱組織中無表達(dá)。 結(jié)論： 三種膀胱腫瘤細(xì)胞與正常膀胱組織比較STK15基因mRNA和蛋白均高表達(dá)；其表達(dá)高低依次為EJ細(xì)胞，5637細(xì)胞，T24細(xì)胞。 第二部分膀胱移行上皮癌組織中STK15的表達(dá)及其與膀胱癌的關(guān)系 目的:本部分探討膀胱移行上皮癌組織及正常膀胱粘膜組織中STK15基因的表達(dá)情況，分析STK15的表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，初步揭示膀胱移行上皮癌發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制。 方法

7、： 應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)不同病理分期及組織分級(jí)的膀胱移行上皮癌標(biāo)本和正常膀胱粘膜中STK15蛋白的表達(dá)情況，應(yīng)用免疫組化自動(dòng)分析系統(tǒng)進(jìn)行分析，結(jié)果以積分光密度(integrated optical density，IOD)表示，探討膀胱移行上皮癌組織中STK15蛋白的表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。 結(jié)果：在RT-PCR結(jié)果中，40例腫瘤組織中均有STK15 mRNA 表達(dá)，IOD值為2.1874±0．3875，10例

8、正常粘膜中STK15mRNA呈陰性表達(dá)，兩組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．01)。 免疫組織化學(xué)結(jié)果經(jīng)過軟件分析后顯示，膀胱移行上皮癌組織中STK15表達(dá)的IOD值為6.6108±2.6762，正常膀胱粘膜組織STK15無表達(dá)，兩組間差異有顯著性意義(P<0.01)，且STK15的表達(dá)與膀胱癌的分級(jí)分期密切相關(guān)(P<0.01)。 結(jié)論： STFK15 與膀胱癌的惡性程度密切相關(guān)，其不僅是膀胱癌的診斷與預(yù)后指標(biāo)，

9、而且為膀胱癌的基因靶向治療提供理論依據(jù)。 第三部分STK15基因單核苷酸多態(tài)與膀胱癌易感性的研究 目的:本部分探討STK15 Phe31Ile基因單核苷酸多態(tài)與膀胱癌易感性的研究。 方法： 以聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)分析方法，檢測(cè)了53例膀胱癌患者和30例正常對(duì)照者 STK15 Phe31Ile基因型，比較不同基因型與膀胱癌發(fā)生和發(fā)展的關(guān)系。 結(jié)果： STK

10、15基因31密碼子等位基因T、A在膀胱癌組和對(duì)照組分布的差異有顯著性(X<'2>=9.332 P=0.00225)，其中等位基因A使患膀胱癌危險(xiǎn)性增加了1.83倍(1.02-4.65)。對(duì)照人群STK15 Phe/Phe、Phe/Ile和Ile/Ile基因型頻率分別為56.67％，30％和13.33％．而膀胱癌病例組分別為22.64％．49.06％和128.30％，STK15基因31密碼子(T-A)各基因型分布兩組間差異有顯著性(X<'