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文檔簡介
1、脂蛋白是由脂肪和蛋白質(zhì)通過非共價結(jié)合形成的一種復(fù)合體,每一種脂蛋白都有其獨特的分子量、化學(xué)組成、濃度及生理功能。本試驗分析了高脂安卡肉雞和低脂如皋黃雞腹脂、總膽固醇、甘油三酯和脂蛋白的濃度(HDL、LDL和VLDL)之間的關(guān)系;探討了LDL受體mRNA在高、低脂雞不同組織中的表達(dá)情況;主要對apo VLDL-Ⅱ基因、脂蛋白酶基因進(jìn)行了SNPs篩查及其與腹脂和血.漿生化指標(biāo)的關(guān)聯(lián)分析,同時分析了這兩個基因之間的互作效應(yīng)對腹脂和血漿生化指標(biāo)
2、的影響:基于SNPs的分析結(jié)果,對紅色原雞、文呂雞、絲羽烏骨雞、如皋黃雞和安卡肉雞群體進(jìn)行了遺傳分化研究,并構(gòu)建了這5個群體的系統(tǒng)發(fā)生樹。主要試驗結(jié)果如下: 1.選用這兩個高、低脂雞品種的120個個體在同一條件下進(jìn)行飼養(yǎng),每2周記錄體重直至12周齡,測定腹脂性狀和I血漿生化指標(biāo)。結(jié)果表明,高脂雞的生長性能優(yōu)于低脂雞,公雞的生長速度快于母雞。高、低脂雞之間體重、腹脂重和腹脂率差異極顯著(P<0.001),這些性狀在公、母之間差異也
3、極顯著(P<0.01)。高、低脂雞中腹脂與體重呈正相關(guān),TCH和HDL水平差異極顯著(P<0.01),公雞的TCH和LDL水平顯著高于母雞(P<0.01)。TCH濃度與HDL、LDL濃度呈正相關(guān),甘油三酯濃度與HDL、VLDL濃度呈正相關(guān)。另外,在低脂雞中,腹脂與所有的生化指標(biāo)呈正相關(guān),高脂雞中腹脂與TCH、LDL濃度正相關(guān)。 2.采用標(biāo)準(zhǔn)的Trizol法提取高、低脂雞腎、肝臟、小腸和腹脂的總RNA,逆轉(zhuǎn)錄,半定量分析不同組織中
4、RNA的表達(dá)水平。結(jié)果表明,LDL受體在腹脂和肝臟中的表達(dá)差異顯著(P<0.05)。另外,LDL受體在高、低脂雞肝臟中的表達(dá)差異顯著(P<0.05)。高脂雞肝臟LDL受體的表達(dá)量與腹脂重呈負(fù)相關(guān),低脂雞肝臟LDL受體的表達(dá)量與總膽固醇濃度、甘油三酯濃度、脂蛋白濃度、腹脂重及腹脂率呈負(fù)相關(guān)。 3.運用PCR-RFLP、PCR-SSCP及測序技術(shù)檢測突變位點。根據(jù)apo VLDL-Ⅱ基因組序列共設(shè)計17對引物,在5個雞群體中,只有5
5、對引物檢測到多態(tài),共檢測到6處突變。分別為:1950 bp(G/A)、2532 bp(T/A)、2706 bp(A/C)、2793 bp(C/T)、4436 bp(T/C)、4473 bp(T/G)。檢測到的突變中有4個位于基因的非編碼區(qū),2個位于外顯子4內(nèi)??ǚ竭m合性檢驗結(jié)果顯示,群體間在引物VLDL9和VLDL17對應(yīng)位點上基因頻率差異顯著。如皋黃雞引物VLDL17對應(yīng)不同的基因型與腹脂顯著相關(guān)(P<0.05),高低脂雞中引物VLD
6、L6、VLDL9、VLDL10對應(yīng)的不同基因型與腹脂顯著相關(guān)(P<0.05)。高脂雞中引物VLDL9對應(yīng)的不同基因型與甘油三酯及vLDL濃度顯著相關(guān),低脂雞中引物VLDL9對應(yīng)的不同基因型與甘油二酯及VLDL濃度顯著相關(guān)。另外,對高、低脂雞的分析表明,引物VLDL9及VLDL17對應(yīng)的基岡型與甘油酯、極低密度脂蛋白濃度顯著相關(guān),引物VLDL10對應(yīng)的基因型與總膽固醇、高密度脂蛋白濃度顯著相關(guān)(P<0.05)。因此,可以認(rèn)為,在引物VLD
7、L9上AA型純合子個體的體重、腹酯重、甘油三酯及VLDL水平顯著高于其它基因型(P<0.05),引物10對應(yīng)的雜合子個體的體重、腹脂重顯著低于其它基因型(P<0.05),總膽固醇和高密度脂蚩白水平顯著高于其它基因型(P<0.05)。 4.根據(jù)基因組序列設(shè)計11對引物擴(kuò)增脂蛋白酶基因,其中位于內(nèi)含子8的2對引物L(fēng)PL9、LPLl0檢測到多態(tài),發(fā)現(xiàn)2個SNP突變,分別為14538bp(C/A)、14977 bp(T/C)。結(jié)果表明,在引物L(fēng)
8、PL10對應(yīng)的位點上,如皋黃雞群體等位基因頻率的哈代-溫伯格檢驗不平衡(P<0.01)。安卡肉雞中,引物L(fēng)PL10對應(yīng)的不同基因型間的腹脂性狀差異顯著(P<0.05),高、低脂兩個群體內(nèi)引物L(fēng)PL9、LPL10分別對應(yīng)的不同基因型個體間的腹脂重差異顯著(P<0.05)。另外,安卡肉雞引物L(fēng)PL9對應(yīng)的基因型與LDL水平顯著相關(guān)(P<0.05),高低脂雞引物L(fēng)PL10對應(yīng)的不同基因型之間總膽固醇、高密度脂蛋白的含量存在顯著差異(P<0.0
9、5)。 5.基因型的互作分析結(jié)果表明,LPL基因CC純合子個體的腹脂重顯著高于TT純合子個體(P<0.05),而在apo vLDL-Ⅱ基因?qū)?yīng)的基因型之間結(jié)果相反。2個基因的互作分析表明,具LPL基因的TT純合子與apo VLDL-Ⅱ基因TT純合子組合(TTTT)的個體的腹脂重顯著高于LPL基因的TT純合子與apo VLDL-Ⅱ基因TC雜合子組合(TTTC)的個體(P<0.05),LPL基因的TC純合子與apo vLDL-Ⅱ基因
10、TT雜合子組合(TCTT)個體的腹脂重顯著高于雙純合子TTCC個體,雙純合子CCTT個體的腹脂顯著高于CCTC個體(p<0.05)。LPL基因的TT個體的總膽固醇和高密度脂蛋白水平顯著高于CC基因型的個體(P<0.05);apo VLDL-Ⅱ基因雜合子個體的總膽固醇和高密度脂蛋白水平顯著高于TT純合子個體(P<0.05)。LPL基因與apoVLDL-Ⅱ基因組合基因型TTTT個體的總膽固醇和高密度脂蛋白水平顯著低于TTTC個體(P<0.0
11、5),TCTT個體的甘油三酯和極低密度脂蛋白水平顯著低于TCTC個體(P<0.05)。另外,CCTT個體的高密度脂蛋白水平低于CCTC個體(P<0.05)。因此,apo VLDL-Ⅱ基因及LPL基因可作為腹脂和血漿膽固醇濃度的候選基因。 6.基于紅色原雞、如皋黃雞、安卡肉雞、文昌雞和絲羽烏骨雞SNPs的分析結(jié)果,估測群體間的遺傳分化并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹。對于apo VLDL-Ⅱ基因而言,安卡肉雞的遺傳多樣性最豐富,而對于LPL基因,
12、絲羽烏骨雞的多樣性最豐富??紤]到2個基因的互作,安卡肉雞的多樣性最高,文昌雞最低。對所有的群體而言,LPL基因的多態(tài)性高于apo VLDL-Ⅱ基因。apoVLDL-Ⅱ基因中紅色原雞的有效等位基因數(shù)最高,而LPL基因中絲羽烏骨雞的有效等位基因數(shù)最高。LPL基因所有的位點上的平均總遺傳多樣度及群體內(nèi)的遺傳多樣度均高于apo VLDL-Ⅱ基因,而apo VLDL-Ⅱ基因所有位點的遺傳分化系數(shù)較高,表明群體間的變異程度較高。所有位點上的總遺傳多
13、樣度的期望值高于群體內(nèi)的遺傳多樣度。所有位點上的平均遺傳分化系數(shù)為0.194,這表明19.4%的遺傳差異是由品種間的差異引起的,而剩余的80.6%是由個體間的差異造成的。LPL基因5個群體所有位點上的平均基因流高于apo VLDL-Ⅱ基因。高低脂雞種LPL基因及apo VLDL-Ⅱ基因遺傳一致度和遺傳距離的估測結(jié)果差異顯著,安卡肉雞(高脂)與絲羽烏骨雞及如皋黃雞(低脂)的遺傳距離最高。構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)生樹也同樣表明,文昌雞和紅色原雞的親緣關(guān)
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