雞甲狀旁腺激素基因真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建及其表達(dá)效果研究.pdf

1、甲狀旁腺激素(PTH)是脊椎動物體內(nèi)調(diào)節(jié)鈣、磷代謝平衡的主要激素之一,由甲狀旁腺的主細(xì)胞產(chǎn)生,其主要的靶器官是骨骼、小腸和腎臟.該研究利用基因重組技術(shù),取45周齡的產(chǎn)蛋新?lián)P州雞甲狀旁腺組織,提取RNA后通過RT-PCR方法成功的擴(kuò)增出雞甲狀旁腺激素基因cDNA,通過TA克隆將擴(kuò)增所得cDNA片斷插入載體pGEM-T內(nèi),通過測序分析得出新?lián)P州雞甲狀旁腺cDNA堿基序列與GenBank上已經(jīng)發(fā)表的序列比較有100％的同源性.蛋雞蛋殼品質(zhì)問題

2、和肉雞腿病問題正日益對家禽生產(chǎn)構(gòu)成嚴(yán)重危害.為了尋找一種廉價而有效的解決方法,我們考慮到了選擇基因治療方法.為此我們將擴(kuò)增所得的雞甲狀旁腺激素基因cDNA片段,通過基因重組技術(shù)將其插入真核表達(dá)載體pCDNA3和pCEP4中,分別構(gòu)建pCDNA3-PTH和pCEP4-PTH真核表達(dá)構(gòu)件.將所得的兩個表達(dá)構(gòu)件通過轉(zhuǎn)化DH5α細(xì)菌,然后通過篩選、鑒定得重組子,將重組子擴(kuò)培后提質(zhì)粒,將提取的質(zhì)粒純化后注射入實(shí)驗(yàn)動物雞體內(nèi),每次每只實(shí)驗(yàn)雞腿部注射

3、400ug,每個真核表達(dá)構(gòu)件注射3只產(chǎn)蛋揚(yáng)州鵝,另有3只產(chǎn)蛋雞作對照,對照組注射400ul5％的葡萄糖溶液.每次注射前空腹采血5ml,每隔2周注射一次質(zhì)粒,共清高射質(zhì)粒2次,采血4次,所采血樣均放置-70℃低溫冰箱保存,取樣結(jié)束后一次性分析.試驗(yàn)結(jié)果:(1)將通過RT-PCR所得的cDNA片段克隆到載體PGEM-T中后測序,所得結(jié)果與GenBank中發(fā)表的序列對比,發(fā)現(xiàn)有100％的同源性.(2)將構(gòu)建好的真核表達(dá)構(gòu)件pCDNA3-PTH