清熱化瘀Ⅱ號方對大鼠腦缺血再灌注損傷MAP1B及β-APP表達的影響.pdf

1、目的：觀察清熱化瘀Ⅱ號方對腦缺血再灌注損傷大鼠腦內β-淀粉樣前體蛋白（β-APP）、微管相關蛋白1B（MAP1B）蛋白的影響，探討清熱化瘀Ⅱ號方對缺血性腦損傷大鼠的神經元保護作用機制。
　　方法：將成年健康 SD大鼠192只（雌雄各半）隨機分為 RT-PCR組和免疫組化組，每組96只隨機分為四組，即空白組（A組）：6只，假手術組（B組）：30只，I/R模型組（C組）：30只。清熱化瘀Ⅱ號方組（D組）：30只。B、C、D每組按照缺血

2、2h后再灌注（I/R）3h、6h、12h、24h、48h五個時間點平均分為5個亞組（n=6）。分別作如下處理：A組正常飼養(yǎng)，自由飲食。B組線栓只插入頸內動脈9mm，術后正常飼養(yǎng)，灌胃生理鹽水。C組生理鹽水灌胃3d后行MCAO2h,再灌注（I/R）后按時間點完全處死動物。D組灌胃清熱化瘀Ⅱ號方3d，術后繼續(xù)灌胃用藥，余操作完全同C組。取材后常規(guī)HE染色并在光學顯微鏡下觀察各組腦組織病理形態(tài)學改變，應用SABC免疫組化法檢測β-APP在海馬

3、CA1區(qū)表達的變化。另一組取材后應用RT-PCR法檢測大鼠海馬區(qū)MAP1B mRNA的表達。
　　結果：1、HE染色結果：清熱化瘀Ⅱ號方組與再灌注模型組病理形態(tài)學比較，在各時間點神經元受損明顯減輕。2、免疫組化結果：①模型組大鼠腦缺血再灌注后3h后隨時間延長β-APP蛋白表達平均光密度值逐漸升高，陽性細胞數逐漸增多，至再灌注12h時其平均光密度值升至最高，陽性細胞數達高峰(P<0.01)，再灌注24h時其平均光密度值降低，陽性細胞

4、數減少，而48h時平均光密度值再次升高，陽性細胞數再次增加（P<0.01）。②與模型組比較，清熱化瘀Ⅱ號方組6h開始隨再灌注時間延長β-APP平均光密度值逐漸升高，陽性細胞數增多(P<0.01)。③以上結果說明，清熱化瘀Ⅱ號方可能通過抑制β-APP蛋白的異常水解，減少Aβ的產生起到腦保護作用。3、RT-PCR分析結果：①大鼠腦缺血再灌注后，與假手術組相比,模型組6h時MAP1B的mRNA表達含量開始增加并隨再灌注時間延長而逐漸升高（P<