清熱化瘀Ⅱ號(hào)方對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷MAP1B及β-APP表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察清熱化瘀Ⅱ號(hào)方對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠腦內(nèi)β-淀粉樣前體蛋白（β-APP）、微管相關(guān)蛋白1B（MAP1B）蛋白的影響，探討清熱化瘀Ⅱ號(hào)方對(duì)缺血性腦損傷大鼠的神經(jīng)元保護(hù)作用機(jī)制。
　　方法：將成年健康 SD大鼠192只（雌雄各半）隨機(jī)分為 RT-PCR組和免疫組化組，每組96只隨機(jī)分為四組，即空白組（A組）：6只，假手術(shù)組（B組）：30只，I/R模型組（C組）：30只。清熱化瘀Ⅱ號(hào)方組（D組）：30只。B、C、D每組按照缺血

2、2h后再灌注（I/R）3h、6h、12h、24h、48h五個(gè)時(shí)間點(diǎn)平均分為5個(gè)亞組（n=6）。分別作如下處理：A組正常飼養(yǎng)，自由飲食。B組線栓只插入頸內(nèi)動(dòng)脈9mm，術(shù)后正常飼養(yǎng)，灌胃生理鹽水。C組生理鹽水灌胃3d后行MCAO2h,再灌注（I/R）后按時(shí)間點(diǎn)完全處死動(dòng)物。D組灌胃清熱化瘀Ⅱ號(hào)方3d，術(shù)后繼續(xù)灌胃用藥，余操作完全同C組。取材后常規(guī)HE染色并在光學(xué)顯微鏡下觀察各組腦組織病理形態(tài)學(xué)改變，應(yīng)用SABC免疫組化法檢測(cè)β-APP在海馬

3、CA1區(qū)表達(dá)的變化。另一組取材后應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)大鼠海馬區(qū)MAP1B mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：1、HE染色結(jié)果：清熱化瘀Ⅱ號(hào)方組與再灌注模型組病理形態(tài)學(xué)比較，在各時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)元受損明顯減輕。2、免疫組化結(jié)果：①模型組大鼠腦缺血再灌注后3h后隨時(shí)間延長(zhǎng)β-APP蛋白表達(dá)平均光密度值逐漸升高，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)逐漸增多，至再灌注12h時(shí)其平均光密度值升至最高，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)達(dá)高峰(P<0.01)，再灌注24h時(shí)其平均光密度值降低，陽(yáng)性細(xì)胞

4、數(shù)減少，而48h時(shí)平均光密度值再次升高，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)再次增加（P<0.01）。②與模型組比較，清熱化瘀Ⅱ號(hào)方組6h開始隨再灌注時(shí)間延長(zhǎng)β-APP平均光密度值逐漸升高，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增多(P<0.01)。③以上結(jié)果說明，清熱化瘀Ⅱ號(hào)方可能通過抑制β-APP蛋白的異常水解，減少Aβ的產(chǎn)生起到腦保護(hù)作用。3、RT-PCR分析結(jié)果：①大鼠腦缺血再灌注后，與假手術(shù)組相比,模型組6h時(shí)MAP1B的mRNA表達(dá)含量開始增加并隨再灌注時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸升高（P<