清熱化瘀Ⅱ號方對急性腦缺血損傷NF-κBp65蛋白及其關鍵靶因子表達的影響.pdf

1、目的：通過研究清熱化瘀Ⅱ號方對急性腦缺血損傷NF-κBp65 蛋白及其關鍵靶因子表達的影響，探討清熱化瘀Ⅱ號方對急性腦缺血損傷的防治作用及其機理。
　　 方法：課題分臨床研究和實驗研究兩部分。
　　 1.臨床研究：根據隨機、盲法、對照的原則，嚴格遵循診斷、納入標準，共收集急性缺血性腦梗死病例72 例，隨機分成治療組與對照組，分別給予清熱化瘀Ⅱ號方和天丹通絡膠囊口服，14 天為一個療程，于治療前后分別檢測全血CD54、CD

2、62P、白細胞、血小板以及血清S100B 蛋白的含量和神經功能缺損及中醫(yī)證候積分。
　　 2.實驗研究：（1）實驗一：采用腦缺血再灌注損傷動物模型，將實驗SD 大鼠隨機分成6 組，即假手術組、模型組、腦血栓片組、清熱化瘀Ⅱ號方低、中、高劑量組，于缺血2h 后再灌注3h、6h、12h、24h、48 分別取材，測定梗死腦組織含水量，觀察大鼠缺血腦組織病理變化及海馬CA1 區(qū)IL-8、TNF-α的表達，并用流式細胞術檢測大鼠全血CD5

3、4、CD62P 的陽性表達率。（2）實驗二：采用腦缺血再灌注動物模型，將實驗SD 大鼠隨機分成7 組，即空白組、假手術組、模型組、對照組、清熱化瘀Ⅱ號方低、中、高劑量組，于缺血2h 后再灌注3h、6h、12h、24h、48 不同時間點取腦，采用Western-blot 實驗技術測定缺血腦組織IκBα蛋白與NF-κBp65 蛋白的表達水平。
　　 結果：
　　 1.臨床研究：（1）治療組治療急性腦梗死臨床總有效率為88.2

4、4％，治療中醫(yī)證候的總有效率91.18％，而對照組分別為74.28％和71.43％，差異有顯著性意義(P＜0.05）；（2）治療組改善神經功能缺損程度和中醫(yī)證候積分的作用顯著優(yōu)于對照組（P＜0.01～0.05）。（3）
　　 治療組具有顯著抑制全血CD54、CD62P 表達、減少白細胞及血小板計數(shù)、降低血清S100B 蛋白的含量等作用，其療效優(yōu)于對照組（P＜
　　 0.01～0.05）。
　　 2.實驗研究：（1

5、）實驗一，①模型組大鼠可見海馬區(qū)嚴重神經元壞死、丟失、排列紊亂和腦水腫，而藥物干預組大鼠海馬區(qū)以神經元變性為主，輕度神經元壞死、丟失及排列紊亂；②清熱化瘀Ⅱ號方可明顯抑制TNF-ａ、IL-8、CD54、CD62L 的表達，顯著降低缺血腦組織含水量，與模型組及對照組比較均有顯著性差異。（P＜0.01～0.05）。
　　 （2）實驗二，①模型組IκBα蛋白在腦缺血再灌注各時間點表達減少，與假手術及空白組比較，差異有顯著性（P＜0.0

6、1）；藥物干預各組中則見IκBα蛋白表達較模型組增加（P＜0.01），而以清熱化瘀Ⅱ號方中、高劑量組IκBα蛋白表達增加顯著。②模型組NF-κBp65蛋白在腦缺血再灌注不同時間點的表達則明顯增多，與假手術及空白組比較，差異有顯著性（P＜0.01）。而藥物干預各組中則見NF-κBp65蛋白表達較模型組明顯減少，而以清熱化瘀Ⅱ號方中、高劑量組NF-κBp65 蛋白表達減少更為顯著（P＜0.01）。
　　 結論：
　　 1、清

7、熱化瘀Ⅱ號方抑制血液CD54、CD62P的表達并下調血清S100B蛋白的含量水平，降低血小板與白細胞黏附，阻止缺血→炎癥→血栓→再缺血的惡性循環(huán)，減輕早期的細胞毒性腦水腫及隨后的血管源性腦水腫，縮小梗死面積，加快神經細胞損傷的恢復而顯著改善神經功能缺損程度和中醫(yī)證候積分。
　　 2、清熱化瘀Ⅱ號方能阻止缺血再灌注后IκBα被降解，減少NF-κB 的釋放，使下游靶因子的轉錄與表達降低，炎癥減輕，進一步控制缺血再灌注損傷而引起的Iκ

8、Bα再解離，從分子水平上打破炎性損傷的惡性循環(huán)而發(fā)揮治療作用。
　　 3、清熱化瘀Ⅱ號方下調細胞因子（IL-8、TNF-ａ）與黏附分子（CD54、CD62L）的表達，抑制NF-κB 的激活，阻斷腦缺血再灌注炎性損傷通路上的不同環(huán)節(jié)，進而抑制NF-κB 與IκBα的分離，最終下調NF-κBp65 轉錄與表達，抑制缺血—炎癥的啟動，對急性腦缺血損傷有重要的意義。
　　 4、清熱化瘀Ⅱ號方通過阻斷瘀血→痰飲→熱毒→血瘀的惡性鏈