可分泌高活性β-半乳糖苷酶的重組乳酸乳球菌株的構(gòu)建及其產(chǎn)酶特性的初步研究.pdf

1、四川大學(xué)博士學(xué)位論文可分泌高活性β半乳糖苷酶的重組乳酸乳球菌株的構(gòu)建及其產(chǎn)酶特性的初步研究姓名：汪川申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)指導(dǎo)教師：張朝武20060401I四Jll大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要可分泌高活性日半乳糖苷酶的重組乳酸乳球菌株的構(gòu)建及其產(chǎn)酶特性的初步研究始菌——兩株保加利亞乳桿菌11480和wch9901進(jìn)行形態(tài)生化鑒定，特別對(duì)酸奶分離菌wch9901進(jìn)行16SrRNA鑒定。對(duì)兩株菌的產(chǎn)酶特性進(jìn)行研究，觀察培養(yǎng)時(shí)間

2、、培養(yǎng)基碳源、搖床轉(zhuǎn)速、氣體環(huán)境對(duì)菌株產(chǎn)酶量的影響。2耐酸耐膽鹽人源乳桿菌的初步篩選：從人胃液標(biāo)本和糞便標(biāo)本中分離出104株人胃腸道源乳桿菌，通過測(cè)定其耐酸、耐膽鹽能力，初步篩選出具有較強(qiáng)耐酸耐膽鹽能力的優(yōu)良菌株。3保加利亞乳桿菌13一半乳糖苷酶基因在大腸桿菌中的表達(dá)研究：PCR擴(kuò)增兩株保加利亞乳桿菌13一半乳糖苷酶基因，并在基因上游加入SD序列和ATGA序列，插入pMG36e構(gòu)建重組質(zhì)粒pMG36e—lacZ，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a(E

3、scherichiacoliDH5a)，表達(dá)非融合B一半乳糖苷酶。遞歸PCR合成乳酸乳球菌分泌信號(hào)肽基因usp45，插入質(zhì)粒pUCl8，構(gòu)建重組質(zhì)粒pUCl8usp，再插入iacZ得到pUCl8usp—lacZ，酶切pUCl8usp1acZ得到usp—lacZ與pMG36e連接，構(gòu)建重組質(zhì)粒pMG36e—usplacZ，轉(zhuǎn)化EcoliDH5a，表達(dá)融合usp45信號(hào)肽的13一半乳糖苷酶。4保加利亞乳桿菌f3半乳糖苷酶基因在乳酸乳球菌中的