半乳糖苷白藜蘆醇脂質(zhì)體的制備、肝靶向性及藥效學(xué)研究.pdf

1、目的: 本實(shí)驗(yàn)合成半乳糖苷(GDE)，并制備白藜蘆醇脂質(zhì)體(RES-LIP)和半乳糖苷修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體(RES-GLIP)，研究?jī)烧咴谛∈篌w內(nèi)的分布，并探討RES-GLIP對(duì)小鼠急性四氯化碳肝損傷模型的治療作用，為白藜蘆醇的臨床應(yīng)用奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法: ①半乳糖苷的合成和鑒定：表面活性劑聚氧乙烯十二烷基醚經(jīng)硅膠柱層析分離得到了HO-(CH2CH2O)n-C12H25(n=3)，經(jīng)糖苷化、脫保護(hù)兩步反應(yīng)制備相

2、應(yīng)的半乳糖苷GDE3，1HNMR鑒定其結(jié)構(gòu)；②采用薄膜超聲分散法制備RES-LIP和RES-GLIP。制備工藝：精密稱(chēng)取處方量物質(zhì)于100mL圓底燒瓶中，加入30mL氯仿：甲醇(1：1)溶解。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，于燒瓶壁上形成一薄膜層。加入6％甘露醇水溶液10mL，冰水浴條件下超聲20min，0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，分裝。通過(guò)正交設(shè)計(jì)優(yōu)化處方，RP-HPLC法測(cè)定載藥量和包封率；③RP-HPLC分析RES生物樣品濃度方法的建立，取血清或

3、臟器勻漿0.1mL，加入1.0mL乙醚漩渦混合1min，取有機(jī)層0.5mL，同法再萃取一次，共1.0mL有機(jī)層溶液于尖底試管中，在40℃水浴中氮?dú)饬鞔蹈?，殘留物?00μL甲醇混懸溶解，6400r·min-1離心10min，上清液20μL進(jìn)樣。選用KromasilC18分析柱，流動(dòng)相為甲醇：水(48：52)，流速1.0mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)303nm；④RES-LIP和RES-GLIP在小鼠體內(nèi)的分布研究，昆明種小鼠90只，隨機(jī)分為

4、18組，每組5只。其中6組為RES-GLIP組，6組為RES-LIP組，其余為RES-sol組。將三組藥物用6％甘露醇溶液配制成濃度為0.2％的混懸液，按10mL·kg-1劑量尾靜脈注射給藥。分別于給藥后5、30min和1、2、4、8h處死一組。小鼠眼靜脈叢取血，處死后取出各臟器(肝、腎、肺、脾)稱(chēng)重，加2倍生理鹽水制成勻漿。血液離心后取血清。RP-HPLC測(cè)定各樣品中RES濃度，并計(jì)算肝靶向效率；⑤建立小鼠急性四氯化碳肝損傷模型，分別

5、按5mg·kg-1·d-1、10mg·kg-1·d-1和20mg·kg-1·d-1三種不同劑量的RES-GLIP尾靜脈給藥，連續(xù)6天，小鼠眼靜脈叢取血后處死，血液離心取血清，測(cè)血清ALT和AST含量，取肝臟做病理組織學(xué)檢查，HE染色，觀察不同劑量RES-GLIP對(duì)于四氯化碳肝損傷模型的治療作用。 結(jié)果: ①1HNMR鑒定結(jié)果證明GDE3結(jié)構(gòu)式正確；②通過(guò)正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化處方，透射電鏡下可見(jiàn)RES-LIP和RES-GLIP

6、呈圓形或橢圓形顆粒，兩者粒徑范圍差異顯著。RES-LIP平均粒徑為100.5±40.2nm，而RES-GLIP平均粒徑為80.4±42.3nm。RES-LIP載藥量為19.81％，包封率為96.52％；RES-GLIP載藥量為19.11％，包封率為95.87％。兩者載藥量和包封率比較，無(wú)顯著差別；③生物樣品中RES檢測(cè)的各工作曲線線性范圍0.25-50μg·min-1，最低檢測(cè)濃度為0.1μg·mL-1(S/N=5)。各樣品提取回收率均

7、大于95％，方法回收率在90％～105％之間，日內(nèi)日間精密度的RSD均小于10％。此方法經(jīng)濟(jì)、可靠、簡(jiǎn)單、快速，可用于動(dòng)物體內(nèi)分布研究；④RES-sol、RES-LIP和RES-GLIP的肝靶向效率分別為0.29、1.47和3.07。給藥30min后RES-GLIP組肝臟的RES含量為RES-sol組的10倍，是RES-LIP組的2.0倍。可見(jiàn)，RES-LIP和RES-GLIP在體內(nèi)具有較好的肝靶向性，RES-GLIP的靶向作用強(qiáng)于RE