車前子營(yíng)養(yǎng)與活性成分及其保健功能研究.pdf

1、本文主要以吉安產(chǎn)大粒車前子為研究對(duì)象，首先根據(jù)古醫(yī)籍文獻(xiàn)中有關(guān)車前子作用的描述及國(guó)外對(duì)歐車前的研究成果，運(yùn)用中藥復(fù)方研究中“有效成分組”的概念，對(duì)車前子單味復(fù)方及分子量大小不同組分進(jìn)行了相關(guān)活性實(shí)驗(yàn)，根據(jù)試驗(yàn)觀察結(jié)果，對(duì)車前子的基本營(yíng)養(yǎng)成分以及苯乙醇苷、低聚糖、多糖等成分進(jìn)行了組成及部分功能研究，取得了一些創(chuàng)新性成果。這些結(jié)果可為拓展車前子新的食用和醫(yī)用空間，深入進(jìn)行車前子的生物學(xué)和醫(yī)藥學(xué)研究、進(jìn)而開發(fā)新型車前子保健產(chǎn)品奠定堅(jiān)實(shí)的理論和

2、實(shí)踐基礎(chǔ)。本文主要研究結(jié)果概述如下： 古醫(yī)籍文獻(xiàn)記載車前子有“久服輕身耐老”、“養(yǎng)肺強(qiáng)陰，令人有子”等作用?！澳I主骨生髓”，現(xiàn)代免疫學(xué)認(rèn)為骨髓是重要的免疫器官，隨著年齡增大，機(jī)體免疫功能下降或紊亂。車前子可能有補(bǔ)腎調(diào)節(jié)免疫功能的作用。為了解該功效，采用地塞米松(Dex)和環(huán)磷酰胺(Cy)免疫抑制劑建立免疫功能低下小鼠模型，觀察了車前子水提液對(duì)模型小鼠免疫功能的影響。在此基礎(chǔ)上，以外周血象、骨髓造血祖細(xì)胞集落培養(yǎng)、CD34+、脾臟

3、指數(shù)等為指標(biāo)，進(jìn)一步觀察了車前子水提液的80％乙醇醇沉上清液(車前L)對(duì)3.5Cy60Coγ射線致小鼠血虛證模型的影響。結(jié)果表明：車前子水提液能顯著增強(qiáng)Dex模型小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬作用、吞噬消化功能及血清溶血素抗體生成水平，使之接近正常水平；明顯提高Cy模型小鼠T、B淋巴細(xì)胞增殖能力及脾臟、胸腺重量和指數(shù)。車前L對(duì)輻射致血虛證小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)量的恢復(fù)、CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-mix、CD34+數(shù)量的回升、脾臟指

4、數(shù)增加均有顯著的促進(jìn)作用。 營(yíng)養(yǎng)與免疫是基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究的一個(gè)非?；钴S的領(lǐng)域，合理營(yíng)養(yǎng)是維持正常免疫功能的重要條件。本文采用現(xiàn)代分析技術(shù)，對(duì)不同產(chǎn)地不同品種車前子的基本營(yíng)養(yǎng)素進(jìn)行了較全面的分析。 在對(duì)基本營(yíng)養(yǎng)素進(jìn)行研究的基礎(chǔ)上，重點(diǎn)對(duì)車前子中可能的免疫調(diào)節(jié)成分進(jìn)行了研究。腎為免疫之本，有研究表明苯乙醇苷類化合物是中醫(yī)補(bǔ)腎壯陽之名藥肉蓯蓉的主要有效成分。低聚糖有促進(jìn)腸道雙歧桿菌等益生菌的增殖作用，腸道正常菌群可以合成維生素B

5、1、B2、B6、B12、泛酸和葉酸等B族維生素，還可以幫助鐵的吸收，這些都是機(jī)體正常造血功能所必須的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。為進(jìn)一步分離追蹤車前子調(diào)節(jié)免疫功能的活性物質(zhì)，本文以車前子L組分中的苯乙醇苷類化合物和低聚糖為目標(biāo)物進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)以乙酸乙酯-水(1：1，v：v)為溶劑系統(tǒng)，首次采用高速逆流色譜法，從車前子中分離得到化合物Ⅰ和化合物Ⅱ，其得率分別為89.8％和84.1％，HPLC純度分別為98.4％和94.2％。所制備的化合物經(jīng)高效液相色譜、

6、紫外可見光譜、大氣壓化學(xué)電離負(fù)離子模式下液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)(LC-APCI-MS)鑒定，并經(jīng)核磁共振儀(MR)確認(rèn)為類葉升麻苷及異類葉升麻苷。異類葉升麻苷為首次從車前子中分離得到的化合物。通過該實(shí)驗(yàn)建立了一種采用高速逆流色譜從車前子中分離制備類葉升麻苷及其異構(gòu)體的簡(jiǎn)便、有效的方法。 在對(duì)車前L組分中低聚糖的研究中，以總含糖量、低聚糖含量及得率、樹脂吸附容量為指標(biāo)，考察了車前子總糖的提取條件、乙醇濃度對(duì)車前子低聚糖精制的影響及7種不同型

7、號(hào)大孔樹脂的優(yōu)化選擇條件。結(jié)果表明：15倍量水煮沸提取2次，每次1h為其最佳提取條件，最佳醇沉濃度為80％，最佳大孔樹脂是2號(hào)。在此基礎(chǔ)上研究了一種適用于工業(yè)化生產(chǎn)的大孔樹脂精制車前子低聚糖的方法。此外，還發(fā)展了一種以硅膠干柱層析－溶劑結(jié)晶法分離純化制備車前子低聚糖純品(PCTOⅠ)的方法，其最佳展開劑為正丁醇：水：冰乙酸(0.72：0.02：0.26)。對(duì)實(shí)驗(yàn)所得PCTOⅠ純品運(yùn)用了二級(jí)質(zhì)譜聯(lián)用(MS-MS)、IR、1H-NMR、13

8、C-NMR、GC-MS、高效離子交換色譜等多項(xiàng)現(xiàn)代分析技術(shù)對(duì)其進(jìn)行解析。結(jié)果表明：PCTOⅠ分子是一個(gè)由半乳糖、葡萄糖、甘露糖組成的三糖，分子量為504Da，其連接方式可能是以a-糖苷鍵連接。目前尚未見車前子中含有該種三糖的文獻(xiàn)報(bào)道。 車前子多糖是車前子中的主要活性成分。在多糖研究中，采用蒽酮-硫酸比色法測(cè)定其含量，對(duì)我國(guó)同屬不同品種、不同采集時(shí)間及炮制前后車前子中的多糖含量進(jìn)行了比較研究。結(jié)果表明：江西吉安產(chǎn)大粒車前子生品多糖

9、含量在9.15％～9.83％之間，炮制后其多糖含量在6.29％～6.81％之間；南昌新祺周車前GAP標(biāo)準(zhǔn)基地的大粒車前子生品多糖含量為7.85％～8.38％，炮制后其多糖含量為6.01％～6.64％；東北產(chǎn)的小粒車前子生品多糖含量為6.61％，炮制后其多糖含量為6.45％。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)車前子多糖含量較穩(wěn)定，不因貯藏時(shí)間而變化，但炮制后會(huì)下降。 本文首次運(yùn)用生物大分子純化系統(tǒng)，采用凝膠柱層析法從車前子中分離、純化得到多糖組分。通過

10、高效凝膠色譜法分析表明該車前子多糖為均一多糖。以己知分子量的T-10、T-40、T-70標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖和藍(lán)色葡聚糖為標(biāo)準(zhǔn)作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)得該車前子多糖分子量為891kDa。GC-MS分析結(jié)果確定這一車前子多糖是由阿拉伯糖、木糖、甘露糖和半乳糖構(gòu)成的雜多糖，其摩爾比為5.6：9.4：1.3：1。從單糖組成的數(shù)目和種類來看，尚未見文獻(xiàn)報(bào)道車前子中含有該種多糖。 為提高多糖得率、縮短提取時(shí)間，本文還研究了微波技術(shù)在車前子多糖提取中的運(yùn)用。

11、通過正交試驗(yàn)確定提取的最佳工藝參數(shù)為：車前子與水的質(zhì)量比為1：15，在微波強(qiáng)度為60％的條件下提取65s。與其它方法比較，微波提取方法時(shí)間短，得率高。 為發(fā)掘我國(guó)車前子的臨床新用，研究中以阿莫西林鈉鹽致小鼠陰道菌群失調(diào)模型，觀察了車前子精制多糖對(duì)它的影響以及車前子精制多糖對(duì)正常小鼠腸功能的影響。結(jié)果表明：精制車前子多糖能顯著提高模型小鼠陰道乳桿菌的數(shù)量，使之接近正常水平，說明精制車前子多糖能促進(jìn)小鼠陰道內(nèi)乳桿菌的生長(zhǎng)，對(duì)陰道菌群

12、失調(diào)有調(diào)節(jié)作用。車前子精制多糖能顯著促進(jìn)正常小鼠小腸的蠕動(dòng)，增加大、小腸的含水量，使腸容積變大，從而軟化大便，有利于大便的排出。用車前子多糖對(duì)老年小鼠連續(xù)30d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)表明，各給藥組小鼠結(jié)腸壁厚度、粘膜厚度、絨毛高度和絨毛表面積與對(duì)照組相比均有非常顯著性差異，提示車前子多糖對(duì)老年小鼠腸粘膜組織的退化具有改善作用。 在上述研究及對(duì)便秘產(chǎn)品市場(chǎng)分析的基礎(chǔ)上，以現(xiàn)代營(yíng)養(yǎng)學(xué)知識(shí)結(jié)合傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論，首次提出對(duì)于中老年功能性便秘應(yīng)以營(yíng)養(yǎng)腸道