車前子多糖的抗炎和抗腫瘤作用研究.pdf

1、車前子多糖(PSP)是由木糖、阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖和半乳糖醛酸等組成的雜多糖，該多糖是一種部分發(fā)酵性膳食纖維，具有整腸通便、調(diào)節(jié)血糖、降低血脂、抗氧化及防治動脈粥樣硬化的作用。但其抗炎和抗腫瘤作用方面的研究甚少，本研究旨在探討PSP的抗炎和抗腫瘤作用及其機(jī)制，從而為PSP的臨床應(yīng)用提供有價值的理論依據(jù)。
　　第一部分車前子多糖的抗炎作用研究
　　目的：本研究以小鼠和大鼠為實(shí)驗(yàn)對象，制作早、中及晚期炎癥模型，觀察P

2、SP對各期炎癥的影響及其作用機(jī)制。
　　方法：1.采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹、冰醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高實(shí)驗(yàn)，觀察PSP對早期炎癥的作用。2.制作大鼠氣囊滑膜炎模型，測定滲出液容積和白細(xì)胞(WBC)數(shù)，用生化試劑盒測定滲出液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和腫瘤壞死因子-alpha(TNF-a)含量及血清中SOD與MDA含量。觀察PSP對中期炎癥的作用及對上述各指標(biāo)的影響。3.通過小鼠棉球肉芽腫實(shí)驗(yàn)，觀察PSP對

3、晚期炎癥的作用。
　　結(jié)果：
　　1.二甲苯致炎后，不同劑量PSP(400、800和1600mg/kg)和陽性對照組(阿司匹林200mg/kg)小鼠耳廓腫脹度明顯減輕，與陰性對照組比較有顯著性差異(P<0.01)。小鼠耳廓腫脹抑制率分別為65.30％、68.04％、80.83％及68.96％。
　　2.冰醋酸注射腹腔后，PSP中、高劑量組和陽性對照組小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性明顯降低，與陰性對照組比較具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0

4、.05)，而PSP低劑量組雖有降低趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。PSP低、中、高劑量組和陽性對照組腹腔毛細(xì)血管通透性抑制率分別為0.01％、30.24％、39.81％及14.51％。
　　3.滲出液體積：陰性對照組為0.67mL，PSP低、中、高劑量組和陽性對照組分別為0.49mL、0.42mL、0.40mL及0.36mL，與陰性對照組相比明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　滲出液白細(xì)胞數(shù)：陰性對照組為63.571

5、×107/L，不同劑量PSP組和陽性對照組分別為38.14、37.43、34.71及35.571×107/L，與陰性對照組相比明顯減少，有顯著性差異(P<0.01)。
　　滲出液TNF-a含量：陰性對照組為144.53pg/mL，不同劑量PSP組和陽性對照組分別為117.98、114.36、110.79及131.67pg/mL，與陰性對照組相比明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　MDA含量：滲出液陰性對照組為1

6、0.83nmol/mL，PSP低、中、高劑量組和陽性對照組分別為6.43、5.35、4.45及3.78nmol/mL；血清陰性對照組為11.00nmol/mL，不同劑量PSP組和陽性對照組分別為7.62、6.07、4.95及4.00nmol/mL。與陰性對照組相比均明顯減少，有顯著性差異(P<0.01)。
　　SOD活性：滲出液陰性對照組為63.64U/mL，PSP低、中、高劑量組和陽性對照組分別為82.82、84.34、91.1

7、0及91.14U/mL；血清陰性對照組為96.14U/mL，不同劑量PSP組和陽性對照組分別為116.08、125.96、131.52及141.32U/mL。與陰性對照組相比明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　4.不同濃度PSP和陽性對照組小鼠棉球肉芽腫重量明顯減輕，與陰性對照組相比，有顯著性差異(P<0.01)。PSP低、中、高劑量組和陽性對照組小鼠棉球肉芽腫抑制率為43.37％、45.38％、51.52％及43.

8、83％。
　　結(jié)論：1.PSP能明顯抑制二甲苯致小鼠耳廓腫脹，改善醋酸所致的小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的增加。2.PSP能顯著減少滲出液體積和白細(xì)胞數(shù)。3.PSP可顯著減少滲出液中TNF-a含量，降低滲出液和血清中MDA含量，提高SOD活性。4.PSP可明顯抑制小鼠肉芽腫重量的增加。
　　第二部分車前子多糖的抗腫瘤作用研究
　　目的：觀察PSP對體外腫瘤細(xì)胞增殖、H22實(shí)體瘤小鼠瘤重及體內(nèi)各項指標(biāo)的影響。
　　方法：

9、
　　1.采用MTT法測定PSP對三種體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞增殖作用的影響。
　　2.采用小鼠H22移植模型，對PSP體內(nèi)抑瘤率進(jìn)行測定，通過檢測脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)，及實(shí)體瘤小鼠血清中MDA、SOD和TNF-a的含量，觀察PSP的抑瘤機(jī)制。
　　3.用碳粒廓清實(shí)驗(yàn)觀察PSP對正常小鼠及環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫力低下小鼠單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)碳粒廓清功能的影響。
　　4.MTT法測定PSP對ConA及LPS誘導(dǎo)T、B淋巴細(xì)胞增殖

10、反應(yīng)的影響。
　　結(jié)果：
　　1.不同濃度PSP處理H22、L1210和A549細(xì)胞24h、48h及72h后，其最高抑制率<10％，提示PSP無明顯的體外抑瘤作用。而5-fu對三種腫瘤細(xì)胞的抑制率明顯增加，最低抑制率>16.68％，且呈一定的時間依賴性。
　　2.PSP(100、400和800mg/kg)和環(huán)磷酰胺(30mg/kg)對H22實(shí)體瘤小鼠瘤重的抑制率為12.34％、23.87％、26.82％及68.16％，

11、提示PSP可明顯增加小鼠瘤重的抑制率。
　　PSP中、高劑量組脾指數(shù)明顯升高，環(huán)磷酰胺組脾指數(shù)明顯降低，與陰性對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而PSP低劑量組雖有升高趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)意義；PSP低、中、高劑量組胸腺指數(shù)明顯升高，環(huán)磷酰胺組胸腺指數(shù)降低，與陰性對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　H22實(shí)體瘤小鼠血清MDA含量：陰性對照組10.99nmol/mL，PSP低、中、高劑量組和環(huán)磷酰胺組分別為1

12、2.21、8.92、7.71及10.28nmol/mL，PSP中、高劑量組與陰性對照組相比明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而環(huán)磷酰胺組和PSP低劑量組與陰性對照組比較無明顯降低。
　　SOD活性：陰性對照組為103.04U/mL，不同濃度PSP和環(huán)磷酰胺組分別為122.72、154.56、131.78及113.6U/mL，PSP中、高劑量組與陰性對照組比較明顯提高，有顯著差異(P<0.01)，而環(huán)磷酰胺組和PSP低劑量

13、組與陰性對照組相比無明顯提高。
　　TNF-a含量：陰性對照組為93.30pg/mL，不同濃度PSP和環(huán)磷酰胺組分別為133.56、164.45、132.45及168.28±pg/mL，與陰性對照組比較明顯增加，有顯著差異(P<0.01)。
　　3.正常小鼠PSP低、中、高劑量組吞噬指數(shù)為5.99、6.06及6.30，與陰性對照組(4.75)相比無明顯增加；免疫力低下小鼠.PSP(100、400mg/kg)和陰性對照組吞噬指

14、數(shù)為6.40、6.66及5.49，與模型組(3.60)相比明顯增加，有顯著性差異(P<0.01)。
　　4.PSP(0.125、0.25、0.5和1mg/L)可明顯增加LPS誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞的增殖，與陰性對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；PSP(0.25、0.5和1mg/L)可顯著增加ConA誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞的增殖，與陰性對照組比較，有顯著性差異(P<0.01)，而PSP(0.125 mg/L)雖有增加趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)意義