黑靈芝元素形態(tài)、活性成分及其保健功能研究.pdf

1、靈芝為擔(dān)子菌綱、多孔菌科(Polyporaceae)靈芝屬(Ganoderma)真菌靈芝(G.lucidum)和紫芝(G.japonicum)的總稱，作為藥物已有悠久歷史。隨著人們對(duì)靈芝化學(xué)成分及其藥理作用的深入研究，證實(shí)靈芝具有多種有效成分和廣泛的生物學(xué)作用，對(duì)人類神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、內(nèi)分泌及代謝系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)均有一定功效，還能提高機(jī)體免疫力、保肝解毒、降血糖、抗腫瘤、抗衰老，在醫(yī)藥臨床、保健食品、化妝品等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。但國內(nèi)外

2、研究過的靈芝屬真菌僅有赤芝(G.lucidum)、紫芝(G.japonicum)、樹舌(G.applanatum)、薄蓋靈芝(G.capense)、南方靈芝(G.austrole)等5種，其中研究最多的是赤芝。迄今為止，尚未見有對(duì)黑靈芝進(jìn)行系統(tǒng)研究的公開報(bào)道。 黑靈芝被稱為靈芝中的極品，對(duì)人體保健具有的藥用療效，遠(yuǎn)比其它種類的靈芝為高。黑靈芝主要對(duì)腎臟機(jī)能有益，增強(qiáng)免疫功能，安眠醒腦，長期食用可調(diào)節(jié)體內(nèi)多種機(jī)能，從而提高機(jī)體的整

3、體素質(zhì)和健康水平。為深入研究和開發(fā)黑靈芝資源，本文采用現(xiàn)代分離分析方法和生物技術(shù)手段，對(duì)江西贛州產(chǎn)黑靈芝進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，建立了一整套靈芝活性成分與功能實(shí)驗(yàn)的系統(tǒng)研究方法，所得結(jié)果可為黑靈芝高附加值產(chǎn)品的研究奠定相關(guān)理論和應(yīng)用基礎(chǔ)?，F(xiàn)將主要研究結(jié)果歸納如下。 1.采用現(xiàn)代元素分析方法研究了黑靈芝中微量元素的含量及其溶出特性，比較了黑靈芝子實(shí)體及孢子粉、赤靈芝子實(shí)體及野生黑靈芝子實(shí)體中的元素含量，利用微波消解、ICP-MS同時(shí)

4、測(cè)定了黑靈芝子實(shí)體和初步純化多糖中微量元素及稀土元素的含量及形態(tài)分布。結(jié)果表明，黑靈芝子實(shí)體及孢子粉中Cu、Mn、Fe、Zn等元素的含量均高于赤靈芝子實(shí)體；黑靈芝酸性多糖中的微量元素及稀土元素的含量大多高于中性多糖；在江西黑靈芝及其多糖中含有痕量稀土元素Ce、Nd、Pr、Y。對(duì)黑靈芝樣品元素測(cè)定的回收率在88.2％～110.6％。研究還發(fā)現(xiàn)，黑靈芝中微量元素在不同極性溶劑中具有不同的浸出率，絕大多數(shù)元素的溶出率隨著溶劑極性增大而增大。初

5、級(jí)形態(tài)分析參數(shù)計(jì)算結(jié)果表明，Cr、Co、Cd元素的浸出率最低，Zn、Fe、Cu和Mn的浸出率較高，Pb的浸出率最高，說明Pb比較容易溶出。大多數(shù)元素的頭煎提取率T1＞二煎提取率T2，但T2值仍然較大，說明進(jìn)行第二次提取非常有必要。濾渣中仍然含有部分元素殘留。 2.采用傳統(tǒng)與現(xiàn)代提取技術(shù)對(duì)黑靈芝中總?cè)祁惓煞值奶崛」に囘M(jìn)行了研究。通過溶劑提取法、超聲提取法、微波萃取法和超臨界萃取法提取工藝條件優(yōu)化實(shí)驗(yàn)并進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)各類方法對(duì)黑靈

6、芝總?cè)祁惢衔锏奶崛÷视筛咧恋鸵来螢椋何⒉ㄝ腿》ǎ境曁崛》ǎ救軇┗亓鞣ǎ境R界萃取法。微波提取法是溶劑提取法的8.9倍，且提取時(shí)間最短，溶劑用量也?。黄渥罴压に嚄l件為：95％乙醇，固液比為1∶25，萃取溫度78℃，微波處理時(shí)間為5min，萃取2次。黑靈芝總?cè)祁惢衔锏妮腿÷蔬_(dá)4.87％。 3.建立了黑靈芝總?cè)祁惡繙y(cè)定的分光光度法以及麥角甾醇的HPLC和TLC分析方法?？?cè)祁惢衔镲@色條件為：5％香草醛-冰醋酸液0.2

7、mL、高氯酸1.2mL，在70℃恒溫水浴中加熱15min，冷至室溫，加入乙酸乙酯使總量為5mL，15min后在550nm處測(cè)定吸光度;以齊墩果酸作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，回歸方程為：A=0.0093C-0.0033(μg)，R2=0.9986(n=6)，線性范圍0～128.4μg，RSD為4.09％，樣品加標(biāo)平均回收率為103.9％。用于黑靈芝中三萜類成分的溶劑回流提取、超聲提取的測(cè)定，結(jié)果證明該方法準(zhǔn)確可靠，可用于靈芝質(zhì)量控制參考。麥角甾醇TL

8、C條件為：展開劑為苯∶乙醇=96∶4，顯色劑為1％香草醛-硫酸，比移值為0.48；HPLC條件為：AglientTC-C18(4.6×150mm，5μm)，G1315BDAD檢測(cè)器，檢測(cè)波長為282nm，流動(dòng)相為甲醇，流速為1mL/min，室溫。 4.采用硅膠柱層析、凝膠柱層析、薄層層析等色譜分離分析方法，結(jié)合NMR、MS等現(xiàn)代儀器手段對(duì)黑靈芝子實(shí)體中酸性組分進(jìn)行了分離、純化及結(jié)構(gòu)表征，首次從黑靈芝中得到麥角甾醇、靈赤酸B甲酯、

9、赤芝酸A等化合物。其分離純化條件為：TLC展開劑為苯∶乙酸乙酯∶乙酸=7∶3∶0.2；硅膠柱層析以氯仿-甲醇梯度洗脫；凝膠柱為SephedexLH20；HPLC采用AlltimaC18，流動(dòng)相為乙腈∶水=40∶60，流速1mL/min。 5.對(duì)黑靈芝提取物的抑菌和抗氧化活性進(jìn)行了研究并與赤靈芝提取物進(jìn)行了比較。結(jié)果表明，黑靈芝和赤靈芝的各種溶劑提取物對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌均有一定的抑制作用，且黑靈芝和赤靈芝的抑

10、菌效果比較一致。它們的乙酸乙酯提取物表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑菌效果，大腸桿菌最低抑菌濃度(MIC)(％)為12.5％～25％，金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌的MIC(％)均為25％。研究還發(fā)現(xiàn)，黑靈芝具有清除DPPH自由基、抑制O2-·自由基的作用，不同溶劑提取物的抗氧化活性強(qiáng)弱為：95％乙醇＞丙酮＞水＞氯仿，提取物用量與抗氧化活性成正相關(guān)，且黑靈芝提取物比赤靈芝提取物的抗氧化能力強(qiáng)：黑靈芝95％乙醇提取物的自由基半清除率濃度EC50=0.2(mg

11、/mL)，而赤靈芝95％乙醇提取物的EC50=0.25(mg/mL)；黑靈芝的丙酮提取物濃度達(dá)到1mg/mL時(shí)已超過10mg/mLBHT清除DPPH·自由基的能力，相當(dāng)于0.5mg/mL抗壞血酸的抗氧化效果；赤靈芝的丙酮提取物濃度達(dá)到3mg/mL時(shí)稍高于5mg/mLBHT清除DPPH·自由基的能力，略低于0.5mg/mL抗壞血酸的抗氧化效果。從O2-·自由基抑制率來看，黑靈芝丙酮提取物濃度在低于1mg/mL時(shí)，抑制O2-·自由基的能力高