茶葉與車前子多糖復(fù)合物活化巨噬細(xì)胞功能的研究.pdf

1、巨噬細(xì)胞是一種非常重要的免疫效應(yīng)細(xì)胞,具有免疫防御、監(jiān)視、調(diào)節(jié)等多種免疫功能,通過吞噬微生物和分泌多種細(xì)胞因子等功能從而來調(diào)控機(jī)體的炎癥免疫應(yīng)答,在機(jī)體的免疫系統(tǒng)中起尤為重要的作用。巨噬細(xì)胞能表達(dá)超過數(shù)十種受體,產(chǎn)生十多種酶,并能分泌數(shù)百種生物活性產(chǎn)物,是體內(nèi)最為活躍的免疫細(xì)胞之一,且其具有強(qiáng)大的吞噬外來異物功能,能主動發(fā)生變形運動,吞噬顆粒性外來抗原或分泌細(xì)胞因子等直接殺傷病原微生物；還能通過其產(chǎn)生的NO及分泌的腫瘤壞死因子(TNF-

2、α)等分子直接殺傷靶細(xì)胞,同時產(chǎn)生具有多種生物活性的物質(zhì)以發(fā)揮其強(qiáng)大的免疫調(diào)節(jié)作用。
　　 自然界中植物種類多種多樣,這些天然植物中,具有免疫調(diào)節(jié)作用的植物也是數(shù)量繁多,如果能研究清楚其有效成分的理化性質(zhì)以及作用機(jī)理,對于植物相應(yīng)功能食品藥品的開發(fā)將具有非常重要的意義。
　　 本研究利用巨噬細(xì)胞建立體外實驗?zāi)Ｐ?對茶葉多糖復(fù)合物(Tea glycoprotein,TGP)及車前子多糖復(fù)合物(Polysaccharide

3、isolated from the seed of Plantagoasiatica L.,PL-PS)的作用進(jìn)行了研究,結(jié)果如下:
　　 1.采用倒置顯微鏡,瑞士染色法觀察細(xì)胞形態(tài)；用MTT法檢測TGP、PL-PS對細(xì)胞生長的影響,發(fā)現(xiàn)PL-PS,TGP在相應(yīng)的濃度范圍內(nèi),對2種巨噬細(xì)胞無毒性。同時觀察細(xì)胞形態(tài),結(jié)果發(fā)現(xiàn)在形態(tài)學(xué)表征上,細(xì)胞形態(tài)和大小表明,這兩種多糖對實驗用兩種巨噬細(xì)胞沒有毒作用,實驗樣品可以用做后續(xù)實驗。

4、r>　　 2.探討了不同劑量PL-PS及TGP對RAW264.7和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌功能的影響。本實驗用Griess和ELISA法檢測各組RAW264.7和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌NO和細(xì)胞因子的量。結(jié)果發(fā)現(xiàn),PL-PS及TGP能夠誘導(dǎo)RAW264.7和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌NO及細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β。提示,PL-PS及TGP活化RAW264.7和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞,可能與使其分泌NO及細(xì)胞因子有關(guān)。
　　 3.本實驗研究

5、了PL-PS及TGP對RAW264.7和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞表型及吞噬功能的影響。我們用流式細(xì)胞分析術(shù)和中性紅吞噬實驗來分析不同劑量PL-PS和TGP對RAW264.7表面CD80、CD86及CD40表達(dá)水平的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)PL-PS和TGP均可促進(jìn)CD80、CD86和CD40的表達(dá)。Control組RAW264.7和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅功能很弱,而經(jīng)不同劑量PL-PS,TGP處理后RAW264.7和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬活性均明顯增

6、強(qiáng)。再次提示PL-PS,TGP可活化巨噬細(xì)胞可能與其增強(qiáng)這兩種細(xì)胞吞噬能力和促進(jìn)其表面細(xì)胞分子表達(dá)有關(guān)。
　　 4.用RT-PCR法對TGP作用后RAW264.7細(xì)胞TNF-α、IL-1βmRNA表達(dá)的檢測表明:各組所提取的總RNA均有β-actin、TNF-α、IL-1β mRNA表達(dá)；各組RAW264.7的β-actin mRNA表達(dá)基本穩(wěn)定,可以作為內(nèi)參；經(jīng)PL-PS和TGP作用后的RAW264.7 TNF-α、IL-1β